Protocolli di colorazione Hoechst: marcatura DNA/RNA per microscopia e citometria a flusso

Coloranti Hoechst

Coloranti fluorescenti (Hoechst 33258 e 33342) che legano DNA → nuclei e mitocondri fluorescenti sotto UV. Standard in laboratori biotech/genetica.

Principali protocolli

Hoechst 33342: colorazione HSC e purificazione cellule staminali

Cellule midollo osseo topo. HBSS+ sali, buffer HEPES, siero vitello fetale. Centrifuga → DMEM pre-riscaldato + Hoechst. Bagno 37°C (98.6°F) x 90 min. Analisi citofluorimetrica: DNA fluorescente.

Hoechst 33342: colorazione DNA standard

Hoechst in acqua distillata + 2% siero vitello fetale, pH 7.2 (buffer). Incubazione 37°C x 1 ora → analisi immediata al citofluorimetro. DNA visibile e fluorescente.

Rilevazione DNA con fluorocromo Hoechst 33258

Spettrofotometro. Soluzione lavoro Hoechst 33258 + DNA timo vitello. Controllo con bromuro etidio. Confronto colorazione nei due mezzi (Current Protocols in Cytometry).