Test Sierologici: Rilevazione Anticorpi, Metodiche e Interpretazione Clinica

Definizione e Principio

La **sierologia** è l'insieme di test di laboratorio che rilevano **anticorpi (immunoglobuline)** o **antigeni** nel siero (o altro fluido corporeo) per evidenziare una risposta immunitaria ad un agente infettivo (o autoantigene). Principio: **Antigene + Anticorpo specifico → Complesso immunitario rilevabile**.

Tipi di Anticorpi e Kinetica

• IgM: prima risposta (5-7 gg post-infezione), pentamerica, alta avidità, non attraversa placenta. Marcatori **infezione acuta/recente**.
• IgG: risposta tardiva (10-14 gg), monomerica, alta affinità, attraversa placenta. Marcatori **infezione passata, immunità, reinfezione/reattivazione** (↑ titolo).
• IgA: mucose (saliva, latte, secrezioni intestinali/respiratorie). Infezione mucosale locale.
• IgE: allergie, parassiti elminti.

Principali Metodiche

Metodo	Principio	Uso Tipico	Vantaggi	Limiti
ELISA (EIA)	Antigene solidificato su pozzetto + siero → Ab legati → coniugato anti-IgG/IgM-HRP → substrato cromogeno/fluorogeno → assorbanza ∝ concentrazione Ab	Screening alta processività: HIV, Epatiti, Sifilide, Torch, Malattie autoimmuni, Allergie	Automatizzabile, quantitativo/semi-quantitativo (indice/ratio), sensibile, economico	Falsi + (cross-reattività, fattore reumatoide), falsi - (finestra sierologica, immunodeficienza), hook effect (raro)
CLIA / CMIA (Chemiluminescenza)	Simile ELISA ma rivelazione chemiluminescenza (acridinio, ruthenio) → sensibilità superiore, range dinamico ampio	Stessi ELISA + dosaggio farmaci, ormoni, marcatori tumorali, cardiaci	Altissima sensibilità/specificità, rapido, ampio range, automatizzato	Costo strumentale/riagenti > ELISA
Western Blot / Immunoblot	Elettroforesi antigeni → transfer membrana → incubazione siero → rivelazione bande specifiche	**Conferma** HIV, Lyme, Sifilide, HTLV, Epatite C (RIBA)	Alta specificità (identifica bande specifiche), risolve falsi + ELISA	Manuale/semi-auto, costoso, tempo, interpretazione soggettiva (criteri CDC/OMS)
Immunofluorescenza (IFA)	Antigene su vetrino + siero → anti-IgG/IgM-FITC → microscopio fluorescenza	Autoimmunità (ANA, ENA, ANCA, anti-dsDNA), Rickettsie, Coxiella, Virus (es. EBV, CMV)	Visualizza pattern (nucleare, citoplasmatico), titolazione	Soggettivo, richiede microscopio/esperto, bassa processività
Agglutinazione (Lattice, Emagglutinazione, Coagglutinazione)	Antigene/Ab su particelle (latex, emazie, Staph A) + siero → agglutinazione visibile	Test rapidi (POC): Streptococco A, Mononucleosi, Febbre reumatica (ASO), Brucella, Leptospira (MAT), Gruppi sanguigni	Rapido (minuti), basso costo, POC, semiquantitativo (titolazione)	Menosensibile/specifico ELISA, prozona (eccesso Ab), lettura operatore-dipendente
Immunocromatografia (Lateral Flow / Rapid Test)	Capillarità su striscia: coniugato oro/latex-Ab → linea test (Ag) / linea controllo	POC: HIV, HCG, Strep A, Influenza, COVID-19, Malaria, Dengue, Sifilide, Rotavirus	Rapidissimo (5-15 min), nessun strumento, uso decentrato, qualitativo	Sensibilità inferiore lab, solo qualitativo, falsi - bassa viremia/anticorpi
Neutralizzazione / Inibizione Emagglutinazione (HI) / PRNT	Siero inibisce infezione cellulare / emagglutinazione da virus	Gold standard sierologico: Influenza, Dengue, Zika, Flavivirus, Enterovirus, Rabbia (RFFIT)	Misura anticorpi **funzionali/neutralizzanti** (correlati protezione)	Complesso, BSL-2/3, lento, costoso, solo laboratori riferimento

Prelievo e Gestione Campione

• Siero: tubo gel/separatore (giallo/rosso), centrifugazione 10-15 min 3000g. Evitare emolisi (falsi + alcune tecniche).
• Plasma (EDTA, eparina, citrato): per alcuni test (HIV Ag/Ab combo, HCV RNA, ecc.).
• Liquido cefalorachidiano (LCR): per diagnosi meningite/encefalite (indice sintesi intratecale IgG, rapporto Albumina LCR/siero).
• Altri: saliva (HIV, SARS-CoV-2), sangue intero (POC), essiccato su carta (DBS - epidemiologia).

Interpretazione Clinica: Chiavi di Lettura

• Finestra sierologica: periodo tra infezione e rilevabilità Ab (IgM: giorni-settimane; IgG: settimane). **Negativo non esclude infezione precoce.** Ripetere a 2-4 settimane (sieroconversione).
• Titolo e dinamica: singolo titolo spesso non diagnostico (salvo cut-off validati). **Quadruplicazione titolo (acuto → convalescenza 2-4 sett) = infezione recente/attiva.**
• Avidità IgG: bassa avidità = infezione recente (3-6 mesi); alta avidità = infezione passata. Utile: CMV, Toxoplasma, Rosolia, Parvovirus B19 in gravidanza.
• Cross-reattività: flavivirus (Dengue/Zika/WNV/YFV), *Treponema* (sifilide/non-patogeni), *Borrelia* (Lyme/altre spirochete), EBV/CMV/HHV-6. Conferma con test specifici (Western Blot, PRNT, avidità).
• Vaccinazione: induce IgG (es. Epatite B, Morbillo, Rosolia, Tetano, Difterite, COVID-19). Distinguere infezione naturale vs vaccinale: antigeni non vaccinali (es. HBcAg per HBV, N-proteina per SARS-CoV-2).
• Immunodeficienza: falsi negativi (ipogammaglobulinemia, terapia immunosoppressiva, B-cell depletion). Ricerca antigenemia / PCR / coltura.

Applicazioni Cliniche Principali

• **Malattie infettive:** HIV, Epatiti A/B/C/D/E, Sifilide, Torch (Toxo, Rosolia, CMV, HSV), EBV, CMV, Parvovirus B19, Virus esantematici (Morbillo, Parotite, Rosolia, Varicella), Enterovirus, Arbovirus (Dengue, Zika, Chikungunya, WNV, YFV, JEV, TBEV), Lyme, Leptospira, Rickettsie, Coxiella, Brucella, *Mycoplasma*, *Chlamydia*, *Legionella*, *Bordetella*, *C. difficile* (tossine), *H. pylori*, TB (IGRA - IFN-γ release assay, non anticorpi), Funghi (Cryptococco, Istoplasma, Coccidioide, Aspergillus - galattomannano/β-D-glucano = antigeni, non Ab).
• **Autoimmunità:** ANA, ENA (anti-dsDNA, Sm, RNP, Ro/SSA, La/SSB, Scl-70, Jo-1), ANCA (PR3, MPO), anti-CCP, anti-TPO/Tg, anti-GAD, anti-AChR, anti-MuSK, anti-LGI1, anti-CASPR2, anti-GQ1b.
• **Allergia:** IgE specifiche (RAST, ImmunoCAP) vs prick test.
• **Epidemiologia / Sorveglianza:** sieroprevalenza, efficacia vaccini, focolai silenti.
• **Medicina trasfusionale / Trapianti:** screening donatori (HIV, HBV, HCV, Sifilide, HTLV, CMV, *T. cruzi*, WNV, Malaria), crossmatch, PRA (anticorpi anti-HLA).

Rischi e Limitazioni

• Prelievo: ematoma, dolore, svenimento (vasovagale), infezione sito (raro), lesione nervosa (raro).
• Pre-analitico: emolisi, lipemia, ittero, campione insufficiente, identificazione errata.
• Analitico: interferenze (eterofili, fattore reumatoide, biotinemia alta → falsi - in test streptavidina-biotina), hook effect, lotti riagenti.
• Post-analitico: interpretazione errata (finestra, cross-reattività, vaccinazione, immunodeficienza), refertazione ritardata.

Conclusione

I test sierologici sono **strumenti potenti ma richiedono contestualizzazione clinica**. Non sono "positivo/negativo" assoluti. Il medico deve integrare: anamnesi, tempo malattia, epidemiologia, vaccinazioni, stato immunitario, dinamica titoli, conferma con metodi ortogonali. **La sierologia non sostituisce la ricerca diretta dell'agente (PCR, coltura, antigeni) nella fase acuta.**