Salute e malattia
"Lisi" dal greco "allentare". Nella lisi cellulare, le forze che tengono unita la membrana vengono interrotte, causandone la rottura. Il contenuto cellulare, inclusa la proteina d'interesse, viene rilasciato nella soluzione circostante. Solitamente si usa una soluzione chimica chiamata tampone di lisi.
Molte soluzioni di lisi sono disponibili in commercio, o si possono preparare con ricette comuni. Il tampone migliore dipende dal tipo cellulare, dalla proteina e dall'applicazione. In generale, contiene un detergente (spesso NP-40 o Triton-X) che scioglie la membrana, più tamponi, chelanti e inibitori delle proteasi per proteggere la proteina una volta rilasciata dall'ambiente protettivo cellulare.
Il tampone si usa ghiacciato, la lisi procede a freddo. La soluzione viene agitata delicatamente per dispersione omogenea. Dopo 5-10 minuti, si neutralizza per fermare l'attività. Queste precauzioni riducono danni alla proteina e detriti da rimuovere dopo.
La lisi chimica è la più delicata e comune, ma metodi meccanici più aggressivi possono servire: sonicazione, cicli ripetuti congelamento-scongelamento, omogeneizzazione (processo di frantumazione). Consultare la letteratura tecnica per il metodo più adatto al caso specifico.
Malattie del sangue