Salute e malattia

Colorazione Safranina O: Protocolli e Applicazioni nella Ricerca Biologica

La Safranina O è una sostanza chimica usata in biologia molecolare come colorante o tintura. Questo colorante reagisce con la cartilagine, che è il tessuto che forma orecchie, naso e articolazioni; endospore batteriche, sostanze di risposta immunodifensiva chiamate granuli e alcune proteine come le mucine. I protocolli Safranina O includono colorazione cartilaginea, colorazione endospore e condilo decalcificato.

Protocollo Colorazione Cartilaginea

Questo protocollo è usato per il rilevamento della cartilagine; mucine, un tipo di proteina ad alto peso molecolare prodotta nei tessuti cutanei; e granuli di mastociti immunodifensivi, fatti di eparina e istamina. I campioni di cartilagine sono trattati con formalina e paraffina, riporta IHC World. I tecnici idratano i campioni con acqua, colorano con ematossilina ferrica di Weigert e la lavano via. Poi colorano i campioni con colorante verde veloce e risciacquano con acido acetico. Aggiungono soluzione safranina O allo 0,1%. Dopo cinque minuti, i campioni sono disidratati con alcol etilico. L'osservazione al microscopio mostra nuclei in nero e citoplasma in grigio-verde. Cartilagine, mucina e granuli di mastociti sono da arancione a rosso.

Protocollo Colorazione Endospore

Le endospore sono strutture formate all'interno di cellule batteriche dormienti o vegetative che servono come meccanismo di sopravvivenza quando gli organismi sono sotto stress. Secondo la Società Americana per la Microbiologia, la safranina può essere usata in congiunzione con colorante verde malachite nello studio di queste cellule vegetative. All'osservazione al microscopio, le endospore sono verdi, mentre le cellule vegetative sono bruno-rossastre o rosa. Le procedure includono fissazione termica dei campioni su vetrini, colorazione verde malachite sotto fonte di calore, lavaggio ad acqua dei campioni e colorazione con safranina O in soluzione alcolica.

Protocollo Condilo Decalcificato

Questo protocollo è usato nello studio di laboratorio della decalcificazione di articolazioni o condili. Secondo Yuehuei An in "Handbook of Histology Methods for Bone and Cartilage," la safranina O in soluzione acquosa è usata per colorare cartilagine e aree prive di calcio. I tecnici colorano vetrini di condilo di coniglio con safranina O per 40 minuti, risciacquano in tre cambi di acqua distillata e immergono i campioni in soluzione alcolica di verde veloce per 30 secondi, seguito da un rapido tuffo in acido acetico. Risciacquano i campioni con acqua e li disidratano con alcol etanolico. Una sostanza chiamata xilene viene aggiunta prima dell'osservazione al microscopio.