Salute e malattia
Con l'aumento dei casi di HIV e AIDS in tutto il mondo, la necessità di test accurati per l'HIV è diventata essenziale. Ora, dopo test ELISA positivi per l'HIV, i professionisti medici utilizzano il test Western blot per confermare un'infezione da HIV positiva. I medici diagnosticano anche la malattia di Lyme attraverso il test Western blot. Il test utilizza metodi di rilevamento complessi: gli operatori sanitari devono trasferire campioni di sangue da un gel a una membrana per facilitare il processo di rilevamento. Per identificare effettivamente gli anticorpi nella membrana, i lavoratori utilizzano enzimi specifici, substrati e/o fluorofori.
La fosfatasi alcalina (AP) costituisce uno degli enzimi principali nel test Western blot. L'AP ha un tempo di reazione lineare, che gli conferisce un vantaggio di rilevamento rispetto ad altri enzimi. Più tempo ha una reazione AP per avvenire, più accurato è il test. Tuttavia, il periodo più lungo può rilevare altri composti chimici e "rumore di fondo", che possono distorcere i risultati del test.
Gli operatori sanitari considerano la perossidasi di ravanello (HRP) superiore all'AP, grazie alle dimensioni minori dell'HRP, all'alta velocità di attività, alla compatibilità con la membrana di reazione, all'affidabilità, al prezzo basso e alla diffusa disponibilità.
I professionisti medici considerano i substrati cromogenici i migliori per visualizzare la reazione interna tra sangue ed enzima. I substrati cromogenici non sono sensibili come altri substrati e tendono a scomparire mentre il blot si asciuga. Ma per una rapida conferma visiva del test, i substrati cromogenici rappresentano una scelta efficace.
I substrati per blotting chemiluminescente richiedono una reazione costante per un test di successo. Se l'enzima cessa l'attività o il substrato si esaurisce, il risultato del test viene perso. Tuttavia, in un test ottimale, il risultato diventa disponibile in 1-24 ore. Gli operatori medici utilizzano apparecchiature di imaging digitale o raggi X per vedere effettivamente il risultato del test, poiché l'occhio nudo non può rilevarlo.
Se gli operatori medici non testano con enzimi e i loro rispettivi substrati, utilizzano anticorpi coniugati con fluorofori. Il test con fluorofori richiede meno passaggi ma necessita di attrezzature speciali. Il test richiede una sorgente luminosa di eccitazione, che causa la reazione appropriata nella membrana. Fluorofori e attrezzature di illuminazione sono costosi, ma gli operatori medici hanno il vantaggio di poter utilizzare più fluorofori nello stesso esperimento.
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