Protocollo TMRE: Valutazione del Potenziale di Membrana Mitocondriale

Il tetrametilrodamina etile (TMRE) è un "colorante a ridistribuzione fluorescente rosso, cationico, lipofilo, lento" usato nel kit MitoPT® TMRE/TMRM Mitochondrial Membrane Potential Assessment Kit (ImmunoChemistry Technologies, LLC). Il processo permette di visualizzare un gradiente di potenziale elettrico transmembrana nelle cellule.

Preparazione dell'Assay

• Protocollo semplice, ~20 minuti a 37°C. Le cellule vive per l'assay richiedono da alcune ore a giorni per la preparazione. Le cellule di controllo possono richiedere alcune ore, in quanto vanno indotte ad apoptosi.

Protocollo Parte 1

• Coltivare cellule a densità ottimale per induzione apoptosi o stress ossidativo, secondo protocollo specifico, ma non superare 10⁶ cellule/mL.

Protocollo Parte 2

• Contemporaneamente, coltivare popolazione di cellule controllo non indotte (stessa densità della popolazione indotta).

Protocollo Parte 3

• Indurre apoptosi o depolarizzare mitocondri intenzionalmente seguendo il protocollo desiderato.

Protocollo Parte 4

• Preparare Buffer Assay/Lavaggio 1X.

Protocollo Parti 5-8

• Parte 5: Preparare stock MitoPT® TMRE/TMRM 1 mM o 0,2 mM.

  Parte 6: Preparare diluizione 1:100 dello stock 1 mM, o 1:20 dello stock 0,2 mM per aggiunta a colture cellulari.

  Parte 7: Colorare le cellule con concentrazione finale 20-200 nM di soluzione MitoPT® TMRE/TMRM.

  Parte 8: Analizzare i dati.