Salute e malattia
Preservare le cellule attraverso il congelamento è essenziale per la ricerca, la medicina veterinaria e l'allevamento animale perché permette di conservare le cellule per lunghi periodi. Il metodo di congelamento selezionato, tuttavia, deve ridurre o prevenire danni alla cellula. L'agente crioprotettivo e il metodo possono dipendere dal tipo di cellula.
Le cellule dovrebbero essere congelate quando sono sane e attivamente in crescita con una vitalità del 90%. Si deve prestare attenzione nella manipolazione ed evitare centrifugazione ad alta velocità e pipettaggio o aspirazione vigorosi per mantenere la vitalità e prevenire danni cellulari.
Un agente crioprotettivo viene usato come sostituto dell'acqua intracellulare. L'agente previene la formazione di cristalli di ghiaccio e la disidratazione nelle cellule. Glicerolo sterilizzato e dimetilsulfoxide (DMSO) sterilizzato sono spesso usati a una concentrazione del 5-15% (volume per volume) diluiti in siero fetale bovino o mezzi di crescita, a seconda del tipo di cellula.
Le cellule nella miscela di congelamento dovrebbero essere raffreddate lentamente. Se non è disponibile un congelatore programmabile, le fiale criogeniche possono essere avvolte in tessuto o poste in polistirolo, il che può rallentare il processo di congelamento. Le cellule dovrebbero essere mantenute a -80 °C per 24 ore e poi trasferite in azoto liquido per la conservazione a lungo termine.
Le cellule congelate dovrebbero essere scongelate rapidamente. Si può usare un bagno d'acqua a 37 °C. Si deve prestare attenzione con le cellule conservate in azoto liquido, tuttavia, poiché l'azoto liquido può entrare nelle fiale ed esplodere allo scongelamento. La miscela di congelamento dovrebbe essere diluita in mezzi di crescita. La vitalità cellulare dovrebbe essere valutata con il colorante blu tripan e le cellule coltivate normalmente.
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