Tecnica di Perfusione: Principi, Applicazioni e Procedura

Cose che Ti Serviranno

• Animale (ratto o scimmia)
• Pompa di perfusione, becher
• Fissativo (4% paraformaldeide)
• Aghi per siringa
• Set gocciolamento perfusione
• Forbici
• Bisturi
• Pinze
• Salina 0,9%
• Scatola ghiaccio

Istruzioni

1. Prepara fresco 4% paraformaldeide mescolando 40g di paraformaldeide in 800ml d'acqua. Riscalda la soluzione a 60°C mescolando. Raffredda a 4°C. Regola pH a 9,5 con pH-metro. Per regolare pH, aggiungi acido acetico glaciale per ottenere pH desiderato.
2. Imposta la pompa di perfusione; collega tutte le parti in vetro e un ago di perfusione. Fai scorrere 100ml d'acqua di rubinetto attraverso il tubo della pompa per rimuovere residui dalle parti in vetro. Metti un becher di fissativo in una scatola ghiaccio.
3. Apri l'estremità del tubo di perfusione e mettilo in un becher di fissativo. Scala il volume della soluzione secondo la dimensione dell'animale. Ora regola la valvola della pompa a un gocciolamento lento e costante. Chiudi la valvola. Riempi l'apparato di perfusione con soluzione salina 0,9% (peso/volume).
4. Prepara gli strumenti chirurgici vicino al tavolo operatorio. Somministra iniezione anestetica all'animale secondo peso corporeo (ketamina 0,5 mg/kg). Metti l'animale sul tavolo operatorio supino.
5. Fai un taglio con bisturi lungo la lunghezza del diaframma. Con forbici grandi, lato smusso verso il basso, taglia i tessuti connettivi alla base del diaframma. Esponi il cuore. Afferra il cuore battente con pinze e inserisci un ago nel ventricolo sinistro.
6. Apri la valvola della pompa per permettere il flusso di soluzione salina 0,9%. Assicurati che la soluzione scorra liberamente e l'animale sia vivo. Il cuore dell'animale dovrebbe battere continuamente. Una volta che il sangue è sostituito dalla soluzione salina, cambia la soluzione a 4% paraformaldeide.
7. Ferma la perfusione e dissemina un tessuto d'interesse. Mantieni il tessuto nello stesso mezzo a 4°C.