Salute e malattia
Le cellule in coltura sono o una forma coltivata in sospensione, come le cellule del sangue, o cellule come i fibroblasti che richiedono una superficie a cui aderire. Alcune superfici potrebbero richiedere un rivestimento in diverse matrici extracellulari a seconda del tipo di cellula e dello studio. Tutte le colture cellulari richiedono condizioni asettiche.
La maggior parte dei tipi cellulari può essere coltivata in mezzo Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) o Roswell Park Memorial Institute (RPMI) con l'aggiunta di 10% siero fetale bovino, 2 millimoli dell'aminoacido glutammina e antibiotici, ad esempio 100 unità penicillina e 0,1 milligrammo per millilitro streptomicina. Le cellule vengono mantenute nei loro mezzi in un incubatore umidificato a 37 °C e 5% anidride carbonica.
Le cellule dovrebbero essere controllate quotidianamente per infezione, morte o crescita. Una volta che la fiala di coltura è ricoperta all'80% da cellule, queste dovrebbero essere divise per mantenere la salute delle cellule e la fase logaritmica di crescita. I mezzi vengono rimossi e le cellule lavate in soluzione salina tamponata con fosfato. Le cellule aderenti richiedono l'aggiunta di tripsina e acido etilendiamminotetraacetico (EDTA) per rimuovere le proteine di adesione cellulare. Un'agitazione delicata dovrebbe rimuovere le cellule. È necessario aggiungere mezzi per neutralizzare la soluzione tripsina/EDTA.
Le cellule diluite e la soluzione tripsina/EDTA possono essere centrifugate per pelletizzare e lavare le cellule. Le cellule possono essere ri-sospese in mezzi e diluite e ripiantate in nuove fiale. Ogni volta che le cellule vengono divise, il numero di passaggio delle cellule aumenta di uno.
Il mezzo dovrebbe essere cambiato due volte a settimana rimuovendo il vecchio mezzo e sostituendolo con nuovo mezzo riscaldato.
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