Test per Diluizione in Agar: Sensibilità Antimicrobica e CMI

Principio del Metodo

Nel metodo per diluizione in agar, soluzioni con numero noto di microrganismi vengono inoculate su piastre di agar nutritivo con concentrazioni graduate di agente antimicrobico. Dopo incubazione ~24 ore, si valuta torbidità, sedimento di crescita o colonie. I microrganismi si classificano: sensibili, intermedi, resistenti.

Concentrazione Minima Inibente (CMI / MIC)

• Obiettivo: determinare la minima concentrazione di antimicrobico (antibiotici, disinfettanti, conservanti) che impedisce la crescita microbica.
• Unità: mg/L.
• Applicazioni: monitoraggio resistenza antibiotica, efficacia conservanti, sviluppo nuovi farmaci.

Metodo Sospensione Colonie

1. Trasferisci piccolo campione di colonie selezionate in tubo con soluzione salina.
2. Agita vigorosamente e lascia riposare.
3. Misura torbidità (crescita) confrontando con standard (es. McFarland) su sfondo bianco, luce adeguata.
4. Tempo: ~5 min per campione.

Metodo Crescita in Brodo

1. Colonie selezionate in tubo con terreno nutriente ricco.
2. Incuba 35-37°C (95-99°F) con agitazione.
3. Durata: 2-6 ore secondo velocità crescita.
4. Valuta torbidità con stesso standard.

Metodo Crescita con Colture Overnight

1. Colonie in terreno ricco incubate overnight.
2. Misura densità ottica a 600 nm.
3. Diluisci 1:100 in terreno fresco, poi 5 diluizioni seriali 1:10.
4. 4 diluizioni spalmate su agar, incubate overnight.
5. Conteggio colonie → UFC/ml (unità formanti colonie per ml).

Standard di Riferimento

CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) ed EUCAST definiscono breakpoint per interpretazione CMI (S/I/R) per specie batteriche e antimicrobici specifici.