Salute e malattia
Lo scopo della colorazione acido-resistente (acid-fast staining) è separare o differenziare organismi acido-resistenti da quelli non acido-resistenti. Questi organismi non rispondono ai coloranti come i normali, risultando difficili da osservare al microscopio. La colorazione acido-resistente li colora per l'osservazione a fini di test medici, come determinare i livelli di certi batteri e microrganismi in pazienti HIV. Mycobacterium e Nocardia sono due esempi specifici di organismi acido-resistenti generalmente ricercati con questi test.
La maggior parte dei batteri viene colorata con colorante di Gram o etanolo per l'osservazione microscopica. Le cellule acido-resistenti, come quelle micobatteriche, resistono alla colorazione con coloranti convenzionali a causa del contenuto lipidico della parete cellulare. Serve quindi una procedura speciale per colorare queste cellule difficili. Esistono tre tecniche che applicano il colore a questi batteri acido-resistenti, riuscendo a cambiare il pigmento cellulare nonostante la resistenza al colore. Queste tre procedure sono: colorazione di Ziehl-Neelsen, colorazione di Kinyoun e colorazione con fluorocromo. Questi metodi creano una pigmentazione più permanente, e i batteri acido-resistenti rimangono colorati più a lungo delle cellule colorate con coloranti tradizionali.
La colorazione di Ziehl-Neelsen si distingue perché usa il calore per colorare i batteri acido-resistenti. È una tecnica in due fasi. Un campione batterico viene saturato con colorante carbol-fucsina nella prima fase. Il vetrino, con il colorante, viene poi riscaldato. Durante il riscaldamento, i batteri acido-resistenti perdono il loro colore e assumono quello della carbol-fucsina (solitamente rosso). Completato questo, si applica una sostanza blu di metilene. Il blu di metilene non lega ai batteri acido-resistenti per i lipidi nella parete cellulare, ma lega agli altri organismi sul vetrino. Risultato: due colori diversi, batteri acido-resistenti rossi e altri organismi blu, distinguibili al microscopio.
Il metodo Kinyoun non usa calore. Invece, usa un colorante fuso molto più forte e concentrato. Questo colorante concentrato lega solo ai batteri acido-resistenti, mentre un colorante di colore diverso lega solo agli organismi non acido-resistenti. Ancora due colori diversi, che permettono di distinguere gli organismi acido-resistenti da quelli non acido-resistenti al microscopio.
L'ultimo metodo, la colorazione con fluorocromo, usa una diversa tecnica di lettura dei risultati. Due tipi di colorante vengono applicati, risultando in organismi acido-resistenti e non acido-resistenti di colori diversi. Tuttavia, il colorante applicato agli organismi acido-resistenti è un fluorocromo, che è fluorescente. Si usa poi un microscopio a fluorescenza per leggere i risultati, che identifica il colorante fluorescente che ha colorato solo gli organismi acido-resistenti.
La tecnica è usata per testare malattie causate da micobatteri. I micobatteri causano infezioni con sintomi simili alla tubercolosi. Tipicamente, queste infezioni compaiono solo in persone con sistema immunitario indebolito, come pazienti HIV o AIDS.
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