Salute e malattia
L'NBT o nitroblue tetrazolio è un composto chimico usato in biochimica e immunologia per rilevare l'enzima fosfatasi alcalina. La sostanza è anche usata nel test diagnostico della malattia granulomatosa cronica, che colpisce le cellule dell'immunodifesa. I protocolli di saggio NBT includono immunoblotting, soluzione substrato fosfatasi alcalina BCIP/NBT e rilevamento di attività galattosidasi e fosfatasi alcalina nei tessuti.
L'immunoblotting è una tecnica usata per rilevare anticorpi, proteine coinvolte nel processo di immunodifesa, afferma Susan R. Haynes in "RNA-Protein Interaction Protocols". Questo include l'uso di NBT, nonché albumina sierica bovina, anticorpi primari 9E10, soluzione colorante Comassie, membrane di nitrocellulosa, soluzione tampone Tris base, persolfato di ammonio, dodecil solfato di sodio e butanolo saturo d'acqua.
I tecnici preparano una soluzione con tre gocce di 1% 5-bromo-4-cloro-3-indolil fosfato (BCIP), tre gocce di 1,5% NBT, due gocce della sostanza chimica Levamisole e tampone fosfatasi alcalina (AP) a pH 9,5, secondo il sito IHC World. La soluzione viene poi incubata a temperatura ambiente e resa disponibile per l'uso.
Le galattosidasi sono enzimi che possono rompere la molecola di galattoside, presente nel batterio Escherichia coli e altri organismi. Secondo Protocol Online, durante questo protocollo, i biologi usano campioni di cellule di ratto trattati con soluzione PBS, glutaraldeide e paraformaldeide. Poi preparano il tampone di reazione bromo-cloro-indolil-galattopiranoside o X-gal per i campioni, usando ferrocianuro di potassio, cloruro di magnesio, desossicolato di sodio e il detergente Nonidet P-40. I tecnici possono usare il nitro blue tetrazolium (NBT) al posto del ferrocianuro di potassio come alternativa più veloce. I campioni cellulari vengono poi osservati al microscopio.
Settore sanitario (generale)