Salute e malattia
L'agar è una sostanza gelatinosa, prodotta da alghe rosse e usata per una varietà di scopi. Uno dei suoi usi comuni è come mezzo di coltura per batteri. L'LB agar è agar nutriente che è stato combinato con brodo di lisogenia (LB). È una credenza comunemente diffusa che LB stia per Luria-Bertani. Tuttavia, il suo inventore, Giuseppe Bertani, afferma nel suo articolo "Lisogenia a Metà del Ventesimo Secolo: P1, P2, e Altri Sistemi Sperimentali", che le iniziali intendevano sempre stare per lisogenia broth, non il suo nome e quello del suo co-ricercatore, Salvador Luria. L'LB agar è versatile e abbastanza semplice da preparare.
Usare un flask Erlenmeyer che contiene il doppio del volume del mezzo che si intende preparare. Mettere triptone, estratto di lievito e sale nel flask Erlenmeyer.
Prestare attenzione alla pressione dell'autoclave o pentola a pressione durante la sterilizzazione. Aggiungere l'acqua distillata o deionizzata e mescolare o agitare per dissolvere la maggior parte degli ingredienti secchi.
Aggiungere l'agar e continuare a mescolare o agitare. Tutto l'agar non si dissolverà, ma è importante che ne entri in soluzione la maggior parte. Evitare grandi grumi di agar non disciolto che si depositano sul fondo del flask.
Sigillare l'apertura del flask con carta alluminio.
Posizionare il flask in un contenitore sicuro per autoclave.
Versare circa 1 cm di acqua nel contenitore.
Mettere il contenitore e il flask nell'autoclave. Impostare l'autoclave per un ciclo liquido e sterilizzare per almeno 20 minuti. Se state usando una pentola a pressione per la sterilizzazione, andate al Passo 8. Altrimenti, saltate al Passo 10.
Se state usando una pentola a pressione, mettere una piccola quantità d'acqua nel cuocitore e posizionare il flask nell'acqua. Non tentare di sterilizzare più di 250 mL alla volta usando questo metodo.
Portare la pentola a pressione a circa 20 psi e sterilizzare per circa 30 minuti.
Rimuovere il flask dall'autoclave o pentola a pressione, facendo attenzione perché il flask sarà molto caldo.
Ruotare delicatamente il flask una volta completata la sterilizzazione. Questo distribuirà l'agar più uniformemente in tutta la soluzione.
Posizionare il flask su una superficie adatta e lasciarlo raffreddare un po'. Se avete preparato 1 L o più di mezzo, date una delicata rotazione ogni 10-20 minuti. Sarete in grado di dire che il mezzo si è raffreddato sufficientemente quando potete tenere il dorso delle dita contro il flask per circa 2 secondi senza che sia scomodamente caldo al tatto. Aspettate circa 15-20 minuti prima di tentare questo.
Posizionare una piastra Petri su una superficie piana. Sollevare delicatamente il coperchio ad angolo, in modo che la maggior parte del piatto rimanga coperta. Non sollevare il coperchio dritto via dal piatto.
Versare il mezzo dal flask nella piastra Petri finché il piatto non è circa a metà pieno.
Rimettere immediatamente il coperchio, spostare il piatto da parte e passare al successivo finché tutte le piastre desiderate non sono state riempite. Le piastre completeranno la loro solidificazione in circa 30 minuti.
Posizionare le piastre Petri nel sacco sterile in cui sono arrivate o in un altro contenitore sterile adatto se non le state inoculando subito. Sigillare il contenitore per preservare l'umidità. Etichettare le piastre se desiderato. Se state conservando le piastre, dovrebbero essere tenute a una temperatura di circa 4-5 gradi C (39-40 gradi F).
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