Rilevazione a Fluorescenza: Principi e Applicazioni

La fluorescenza è usata come metodo di rilevazione in molte tecniche di caratterizzazione molecolare chimiche e biologiche.

Basi della Fluorescenza

• La fluorescenza avviene quando la luce di una certa lunghezza d'onda (spesso ultravioletta) è diretta su un materiale che può assorbire questa luce ed emettere luce a una lunghezza d'onda diversa, più lunga. Spesso questa emissione è luce visibile, facendo apparire il materiale come se brillasse.

Fluorescenza Diretta

• Alcune molecole sono naturalmente fluorescenti e possono essere studiate usando la fluorescenza diretta. Fattori tra cui la vicinanza ad altre molecole e le interazioni con il solvente possono cambiare le proprietà fluorescenti di una molecola. Questi cambiamenti danno informazioni su interazioni molecolari, aggregazione e auto-assemblaggio.

Immunofluorescenza

• Nell'immunofluorescenza, anticorpi fluorescenti sono usati per rivelare certe strutture cellulari. Questo può essere usato per identificare cellule di tipi diversi, visualizzare particolari organelli cellulari, misurare il metabolismo cellulare e per molti altri scopi.

Marcatura Fluorescente del DNA

• Anche se il DNA stesso è solo debolmente fluorescente, molte tecniche di biologia molecolare si basano sulla preparazione di complessi fluorescenti di DNA per quantificazione, sequenziamento e tracciamento.

Altri Metodi

• L'elenco dei metodi di rilevazione fluorescente è lungo e vario. Le proteine possono essere ingegnerizzate per contenere domini fluorescenti, permettendo loro di essere tracciate all'interno delle cellule e persino dentro gli organismi. La fluorescenza può essere usata in cromatografia per separare una molecola di interesse da una miscela e in biofisica per determinare la velocità di cambiamento conformazionale di una singola molecola.