Analisi Dot Blot: Principi, Applicazioni e Limiti

Cos'è il Dot Blot (o Slot Blot)

Tecnica di biologia molecolare per rilevare biomolecole (DNA, RNA, proteine) depositandole come un punto su una membrana. Sonde nucleotidiche o anticorpi ne rivelano la presenza/assenza, ma non forniscono informazioni sulla dimensione della biomolecola; servono altri test.

Tecniche Correlate di Blotting

Southern Blot

• Rileva una specifica sequenza di DNA. Combina trasferimento di frammenti DNA separati chimicamente su membrana e ibridazione con sonda.
• Determina il numero di copie geniche in un genoma. Sviluppata da Edwin Southern (1975).

Northern Blot

• Studia l'espressione genica rilevando RNA. Permette di osservare il controllo cellulare su struttura e funzione.
• Separa campioni RNA per dimensione e rileva parte della sequenza target. Sviluppata a Stanford (1977).

Western Blot

• Detecta proteine specifiche in un campione tissutale (immunoblot). Usa elettroforesi su gel per separare proteine per lunghezza polipeptidica o struttura.
• Dopo trasferimento su membrana, anticorpi specifici rivelano la proteina target.
• Usata per diagnosi di HIV, mucca pazza, alcune forme di Lyme, epatite B, AIDS felino.

Southwestern Blotting

• Identifica e caratterizza proteine leganti DNA tramite capacità di legare sonde specifiche. Combina protocolli Southern e Western (elettroforesi su gel + trasferimento su membrane cellulari).