Test ELISA: rilevazione anticorpi e applicazioni

Il test ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) è il test commercialmente più usato per rilevare la presenza di anticorpi. Serve per screening su uso di droghe, gravidanza, AIDS, epatite, tra gli altri. È popolare per facilità d'uso e basso costo.

Occorrente

• Campione di siero
• Piastra ELISA
• Antigeni che coniugano l'anticorpo da testare
• Anticorpi enzimatici o anticorpi secondari
• Indicatore enzimatico di cambiamento colore
• Carta assorbente
• Occhiali protettivi

Istruzioni

1. Depositate un antigene noto sulla superficie di diversi pozzetti. Coprite ogni pozzetto con 50 microlitri di fluido IgG. Non disturbate per 5 minuti. Sciacquate i pozzetti con acqua di rubinetto. Ripetete il risciacquo cinque volte. Tamponate il pozzetto su carta assorbente per asciugare. Non strofinate i pozzetti.

2. Aggiungete campioni di fluido corporeo (siero) ai pozzetti. Questi campioni possono contenere la soluzione coniugata e competitiva. Si legheranno se gli anticorpi sono presenti. I campioni di siero vanno diluiti per coniugarsi all'antigene del passo 1.

3. Aggiungete una proteina (es. caseina) ai pozzetti. Impedisce ad altre proteine non testate di aderire alla piastra.

4. Lavate la piastra sciacquando delicatamente con acqua di rubinetto sui pozzetti. Tamponate il lato della piastra su carta assorbente per rimuovere acqua in eccesso. Ripetete il lavaggio altre quattro volte. Non strofinate i pozzetti. Aggiungete l'anticorpo che corrisponde a quello testato.

5. Lavate di nuovo la piastra (sciacquo delicato, tamponamento, ripetere 4 volte). Non strofinate. Questo lavaggio rimuove antigeni non legati. I pozzetti ora contengono solo complessi anticorpo-antigene testati. Lavate la piastra per rimuovere coniugati enzima-anticorpo non legati.

6. Aggiungete anticorpi secondari (anti-anticorpi) ai pozzetti. Si legano agli anticorpi di rilevamento. Gli anticorpi secondari sono coniugati all'indicatore di cambiamento colore e all'antigene aggiunto al passo 1.

7. Lavate la piastra (sciacquo, tamponamento, ripetere 4 volte). Non strofinate. Rimuove anticorpi secondari enzimatici non legati.

8. Applicate l'indicatore enzimatico di cambiamento colore alla piastra. I pozzetti con gli anticorpi testati cambieranno colore.

9. Osservate i pozzetti per un cambiamento colore, che indica la presenza dell'anticorpo nel campione di fluido corporeo.