Salute e malattia
La biologia molecolare e la batteriologia utilizzano le piastre agar per coltivare microrganismi come i batteri a scopo sperimentale. L'agar è l'agente che solidifica, o gelifica, un mezzo nutritivo liquido necessario alla sopravvivenza e alla crescita del microrganismo. Una volta trasferiti su una piastra agar, i batteri crescono formando colonie distinte (se coltivati a basse concentrazioni) o strisci (se ad alte concentrazioni) e possono essere raccolti per l'analisi. La preparazione delle piastre agar richiede l'accesso a reagenti e macchinari di grado laboratorio, oltre a una solida conoscenza di biologia molecolare e tecniche sterili.
Preparazione e sicurezza: Indossare l'equipaggiamento di protezione (guanti, camice, maschera) e decontaminare tutte le superfici. Lavorare accanto a un Bunsen burner o, preferibilmente, in una cappa a flusso laminare sterile per evitare che contaminanti aerodispersi cadano nell'agar.
Predisposizione delle piastre: Estrarre la pila di piastre di Petri dalla confezione, conservando l'involucro per il reimballaggio. Etichettare la superficie esterna del fondo (non il coperchio) con il tipo di agar e la data di preparazione. Disporre le piastre in un unico strato con i coperchi sollevati per facilitare la colata.
Preparazione del mezzo: Mescolare bacto-triptone, estratto di lievito e agarosio, quindi aggiungere la soluzione di idrossido di sodio (NaOH). Aggiungere acqua distillata sterile fino a ottenere 1 L di mezzo nutritivo. Trasferire la soluzione in una bottiglia di vetro da almeno 1,5 L. Avvitare il tappo in modo non ermetico, etichettare con data e nome del mezzo, applicare una striscia di nastro per autoclavaggio e autoclavare per 25 minuti. Lasciare raffreddare la bottiglia fino a 45-50 °C (sotto i 45 °C l'agar solidificherebbe prematuramente). Le bottiglie di agar raffreddato e solidificato possono essere conservate a 4 °C e riscaldate fino a liquefazione. Se l'esperimento lo richiede, aggiungere il supplemento appropriato (es. antibiotici) verificando attentamente che la temperatura del mezzo non sia troppo alta, altrimenti i supplementi verrebbero distrutti.
Colata dell'agar: Versare un volume sufficiente di agar fuso per riempire a metà la piastra, assicurandosi che la superficie sia completamente coperta. Evitare eccessi o che l'agar raggiunga il bordo. Mantenere le piastre in atmosfera sterile lasciando il Bunsen burner o la cappa a flusso laminare in funzione. Lasciare solidificare l'agar, quindi richiudere i coperchi.
Asciugatura delle piastre: Asciugare le piastre per 30-60 minuti in forno a max 37 °C. In alternativa, lasciarle nella cappa a flusso laminare per 3 minuti o su un banco decontaminato in zona a basso traffico e senza correnti d'aria per 1-2 giorni. L'asciugatura impedisce che le soluzioni batteriche poste sulla superficie si diluiscano e scivolino via invece di formare colonie aderenti.
Conservazione: Riporre le piastre al buio a 4 °C. Impilarle con il fondo rivolto verso l'alto per leggere facilmente le etichette e prevenire contaminazioni da microrganismi o detriti. Rimettere le piastre nella confezione originale, coprire con carta alluminio e sigillare con nastro adesivo. Etichettare il pacchetto con contenuto e data. Le piastre si conservano fino a due mesi; scartarle successivamente.
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