Mappa plasmide pcDNA3.1: elementi chiave per espressione mammaliana

La famiglia plasmidi pcDNA3.1 (Invitrogen/Thermo Fisher) è un vettore espressione mammaliano ampiamente usato. Elementi chiave includono:

Caratteristiche principali

• Promotore CMV: promotore costitutivo forte per alta espressione in cellule mammaliane (non T7—T7 è per trascrizione in vitro).
• Sito clonaggio multiplo (MCS): fiancheggiato da siti restrizione per clonaggio direzionale.
• Segnale poliadenilazione BGH: poliA ormone crescita bovino per stabilità mRNA ed esportazione nucleare.
• Origine SV40: per replicazione episomale in cellule esprimenti large T antigen SV40 (es. HEK293T).
• Origine f1: produzione DNA singolo filamento per sequenziamento/mutagenesi.
• Resistenza neomicina/kanamicina (Neo^R/Kan^R): selezione G418 in cellule mammaliane; kanamicina per selezione batterica.
• Resistenza ampicillina (Amp^R): selezione batterica (β-lattamasi).
• Origine ColE1: replicazione high-copy in E. coli.
• Promotore T7: a monte MCS per trascrizione in vitro (IVT).

Differenze versioni

• pcDNA3.1(+): CMV → MCS → BGH polyA orientazione forward.
• pcDNA3.1(-): orientazione reverse (utile per certe strategie clonaggio).
• pcDNA3.1/V5-His, /myc-His, /HA: includono epitope tag e His₆ per detezione/purificazione.
• pcDNA3.1/CT-GFP, /NT-GFP: varianti fusione GFP.

Applicazioni

Trasfezione transiente/stabile, generazione linee cellulari stabili, espressione proteica, studi funzionali, produzione anticorpi. High copy number in E. coli facilita preparazione plasmide.

Nota: La descrizione originale elencava erroneamente T7 come promotore mammaliano. CMV è il promotore mammaliano; T7 è per IVT.