Test Anticorpi Antinucleari (ANA): Procedura, Pattern e Utilità Clinica
Il test Anticorpi Antinucleari (ANA) rileva autoanticorpi diretti contro componenti nucleari. È uno screening per malattie autoimmuni sistemiche, soprattutto lupus eritematoso sistemico (LES).
Procedura del Test (Immunofluorescenza Indiretta - IIF)
- Prelievo Sangue: Prelievo venoso in tubo separatore siero (SST) o tappo rosso. Non serve digiuno.
- Separazione Siero: Centrifuga → raccolta siero.
- Preparazione Substrato: Cellule HEp-2 (linea carcinoma epiteliale umano) fissate su vetrini—esprimono >100 antigeni nucleari/citoplasmatici. (Storicamente: sezioni fegato/rene roditore.)
- Incubazione Siero: Siero paziente (diluito, tipicamente 1:40, 1:80, 1:160, 1:320, 1:640, 1:1280) applicato su vetrini. Incubare 30 min a RT.
- Lavaggio: Rimuovere anticorpi non legati.
- Rilevazione: Anti-IgG umano marcato con fluoresceina (o IgG/IgM/IgA) aggiunto. Incubare, lavare.
- Visualizzazione: Microscopio a fluorescenza. Pattern: omogeneo, punteggiato, nucleolare, centromero, membrana nucleare, citoplasmatico.
- Interpretazione: Titolo = diluizione più alta con fluorescenza visibile. Il pattern suggerisce autoanticorpi specifici (es. omogeneo → anti-dsDNA, cromatina; punteggiato → anti-Sm, RNP, SSA/Ro, SSB/La; centromero → anti-centromero; nucleolare → anti-Scl-70, RNA Pol I/III).
Utilità Clinica
- LES: ~95% sensibile; titolo ≥1:160 + criteri clinici supporta diagnosi.
- Altre malattie: Sjögren, sclerodermia, polimiosite/dermatomiosite, MCTD, epatite autoimmune, lupus farmaco-indotto.
- Falsi positivi: Individui sani (fino 15% a 1:40, 5% a 1:160), infezioni, farmaci, invecchiamento.
Follow-Up
ANA positivo → pannello autoanticorpi specifici (EIA, multiplex, line blot) per anti-dsDNA, Sm, RNP, SSA, SSB, Scl-70, centromero, Jo-1, ecc.
L'ANA è uno strumento di screening, non diagnostico da solo. La correlazione clinica è obbligatoria.