Protocollo Co-Immunoprecipitazione (Co-IP): Guida Completa
Il protocollo di co-immunoprecipitazione (Co-IP) è una procedura ampiamente usata per analizzare interazioni proteiche. Generalmente comprende tre fasi: un anticorpo viene introdotto in un lisato cellulare, il complesso anticorpo-proteina viene legato chimicamente e la proteina identificata tramite analisi.
Riassunto Co-IP
Serie di passaggi per risultati accurati:
- Anticorpo specifico per la proteina target aggiunto al lisato.
- Proteina-G o proteina-A sepharosa usata per legare complesso anticorpo-proteina.
- Sequenziazione banda proteica purificata o Western blot per identificare proteina co-precipitata.
Passaggi Generali
Il protocollo si divide in tre fasi meccaniche:
- Flusso di lavoro per completare la procedura nel minor tempo.
- Considerazioni generali per la procedura.
- Troubleshooting.
Passaggi Specifici
- Workflow: dalla preparazione della coltura per analisi blotting alla determinazione presenza proteine.
- Considerazioni generali: pre-pulizia, scelta buffer, selezione Resina Proteina A o G.
- Troubleshooting: problemi come mancata rilevazione proteina, legame anticorpi-proteine, frammenti anticorpi, possibile Co-IP fallito.