Salute e malattia
Gli scienziati hanno solitamente bisogno di solidificare i campioni biologici per sezionarli. Questo rende più facile aggiungere coloranti, anticorpi e sonde al campione. Riduce anche la sovrapposizione dei vari strati cellulari. Gli scienziati usano la cera di paraffina come matrice dura per il taglio, poiché la paraffina non si mescola con l'acqua. La paraffina è un tipo di idrocarburo. I campioni biologici contengono acqua, quindi gli scienziati devono disidratarli usando bagni di etanolo a concentrazione crescente.
Gli scienziati rimuovono l'etanolo usando xilene. Poi usano cera di paraffina fusa per rimuovere lo xilene. Per microscopia ottica, le sezioni di paraffina sono solitamente spesse 5 µm. La cera di paraffina non è abbastanza dura per fette più sottili. Gli scienziati reidratano il tessuto usando prima xilene, poi etanolo. Poi risciacquano il campione biologico con acqua distillata per evitare contaminazioni.
I tessuti inclusi in paraffina sono solitamente fissati usando formalina tamponata neutra, la versione commerciale della formaldeide. Questo include paraformaldeide e metanolo, che impedisce alla formaldeide di convertirsi in acido formico. Tessuti sottili necessitano 48 ore di fissazione a temperatura ambiente per un'istologia ottimale (studio dell'anatomia microscopica). Altrimenti, il tessuto indurisce e diventa friabile. Prima del processamento, il tessuto viene solitamente conservato in etanolo al 70% a 4°C.
Gli scienziati usano spesso processori per paraffina per far passare il tessuto attraverso bagni che lo disidratano gradualmente prima che la paraffina calda possa penetrare nei tessuti. Il processore gira durante la notte. Riscalda il tessuto solo per un certo tempo dipendente dal tessuto, per evitare che diventi duro e friabile. Il processore usa un vuoto che accelera la permeazione della paraffina e rimuove le bolle d'aria. Una volta processati, i tessuti vengono conservati in cassette a temperatura ambiente.
La paraffina fonde per un'ora prima di aggiungere il tessuto. L'intera cassetta viene posta in un bagno di paraffina a 65°C per 15 minuti. Un dissipatore di calore in alluminio freddo raffredda la cera di paraffina per 20 minuti. Se la cera si crepa o i tessuti non sono allineati correttamente, lo scienziato rifonde la paraffina e ripete il processo.
Durante la sezionatura, lo scienziato porta il bagno d'acqua a 35-37°C. L'acqua è fresca e deionizzata. I blocchi vengono posti a faccia in giù su un blocco di ghiaccio o dissipatore di calore per 10 minuti. Una lama taglia il blocco in sezioni. Due problemi che possono verificarsi: scarsa formazione a nastro (ribboning) e frammentazione dei campioni. Se i campioni si frammentano, l'acqua è troppo calda. Se il blocco non forma bene il nastro, rimettetelo sul blocco di ghiaccio e indurite la cera prima di ricominciare.
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