Salute e malattia
Un saggio immunoenzimatico (ELISA) implica la reazione di un complesso anticorpo-enzima con un antigene o anticorpo immobilizzato su una superficie solida. All'incubazione dell'enzima coniugato con un substrato adatto, si forma un prodotto. La formazione del prodotto aiuta a rilevare la presenza dell'antigene o anticorpo e la sua quantità fornisce una misura della quantità di reazione antigene-anticorpo avvenuta. Il test ELISA può essere eseguito in due forme: diretto e indiretto.
Nel test ELISA diretto, un anticorpo primario è immobilizzato sulle pareti di una piastra a microwell. Quando si aggiunge il campione sospetto di contenere l'antigene, avviene una reazione antigene-anticorpo. Successivamente, si aggiunge un anticorpo secondario coniugato all'enzima capace di reagire con l'antigene. Se l'antigene è presente nel campione, si lega a questo anticorpo enzimatico. Quando si aggiunge un substrato incolore, se si sviluppa un colore, indica la presenza dell'antigene. Nell'ELISA indiretto, l'antigene è immobilizzato sulle pareti della piastra. Quando si aggiunge un campione sospetto di contenere anticorpi, avviene una reazione antigene-anticorpo. Successivamente, si aggiunge un anticorpo secondario enzimatico capace di reagire con la regione non legata dell'anticorpo. Quando si aggiunge il substrato incolore, porta a sviluppo di colore se il campione contiene anticorpi.
Una vasta gamma di anticorpi secondari marcati è disponibile commercialmente. Inoltre, è possibile creare diversi anticorpi primari in una data specie e usare lo stesso anticorpo secondario per il rilevamento. Questo rende l'ELISA indiretto facile da eseguire. Nell'ELISA diretto, gli anticorpi primari devono essere specificamente preparati per reagire con l'antigene specifico sospettato nel campione. Questo rende l'ELISA diretto svantaggioso rispetto al test indiretto.
Il test ELISA diretto è rapido rispetto a quello indiretto perché usa solo un singolo anticorpo. L'ELISA indiretto richiede un passaggio aggiuntivo di incubazione con un secondo anticorpo durante la procedura, che causa un ritardo nell'ottenimento dei risultati.
Il test ELISA diretto è meno sensibile della forma indiretta perché c'è molta meno amplificazione del segnale. Inoltre, la marcatura dell'anticorpo primario con un enzima può compromettere il suo profilo di immunoreattività. Nel caso dell'ELISA indiretto, l'anticorpo primario non è marcato e quindi mantiene la sua immunoreattività. Inoltre, ogni anticorpo primario ha molti epitopi che possono legarsi con l'anticorpo secondario; questo permette l'amplificazione del segnale, migliorando la sensibilità del metodo. Tuttavia, c'è una possibilità di reattività crociata tra l'antigene e l'anticorpo secondario, portando a un errore nei risultati. Non c'è tale possibilità nel metodo ELISA diretto.
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