Identificazione Batteri Gram-Positivi: Guida Passo-Passo

Introduzione

Il passo fondamentale per identificare batteri Gram-positivi è la colorazione di Gram (Hans Christian Gram, 4 fasi: striscio, colorazione, controcolorazione, osservazione). Dopo, si indagano ulteriori caratteristiche.

1. Preparazione dello Striscio

Con ansa di inoculazione o bastoncino, prelevare piccolo campione (solitamente da piastra Petri) e strisciare su vetrino. Lasciare asciugare (eventualmente fiamma bassa per accelerare).

2. Applicazione della Colorazione Primaria

Campione asciutto: applicare violetto di cristallo (violaceo scuro). Dopo ~1 minuto, risciacquare eccesso con acqua/alcol. Applicare lugol (iodio) come mordente: fissa il colorante ai batteri ("fissaggio del colorante").

3. Controcolorazione

Dopo fissaggio: altro risciacquo, poi controcolorante safranina (rosa). Carta assorbente per asciugare. Vetrino pronto per microscopio.

4. Osservazione al Microscopio

Gram-positivi: bruno/viola scuro (colore violetto cristallo). Parete cellulare ricca di peptidoglicano (sostanza reticolare che dà forma/resistenza). Gram-negativi: rosa (safranina). Senza controcolorazione, trasparenti e difficili da vedere. Gram-negativi hanno meno peptidoglicano, in posizione diversa (strato interno); strato esterno resiste al violetto.

Dopo la Colorazione di Gram: Classificazione Ulteriore

Test aggiuntivi: morfologia, struttura, motilità, genetica. Quattro famiglie principali:
Bacillaceae: bastoncelli. Se mobili, flagelli peritrichi.
Micrococcaceae: cocchi. Immobili. Divisione in tetradi (gruppi di 4).
Mycobacteriaceae: bastoncelli leggermente curvi. Divisione a rami o forme incrociate allungate.
Peptococcaceae: cocchi. Anaerobi obbligati, alcuni intolleranti al sale.
Grande variabilità entro ogni famiglia.