Salute e malattia
Le cipolle (Allium cepa) sono usate per valutare rischi ambientali permettendo alle radici in sviluppo di entrare in contatto con sostanze da testare. Dopo sufficiente esposizione, le radici vengono rimosse, colorate e macerate così che i cromosomi cellulari siano visibili al microscopio ottico. La tossicità è evidenziata se si rilevano anomalie cromosomiche o della divisione cellulare. Le punte radicali sono usate perché le cellule lì crescono e si dividono attivamente, dando buona probabilità di vedere cromosomi in diversi stadi di divisione.
Rimuovi la buccia secca esterna di 12 cipolle. Raschia il fondo attorno alle piastre basali senza danneggiare l'area da cui emergeranno le radici.
Scegli becher con imboccatura abbastanza larga da tenere il fondo delle cipolle immerso nei liquidi di test. Riempi i becher con acqua distillata e metti le cipolle a contatto con l'acqua. Scherma i lati dei becher con carta alluminio per simulare l'oscurità sotterranea. Cambia l'acqua quotidianamente.
Esamina le basi delle cipolle dopo due giorni. Le radici dovrebbero essersi formate. Valuta la crescita radicale e scarta le due cipolle con crescita più debole.
Prepara una seconda serie di cinque becher ciascuno con un campione del materiale da testare, come acque reflue o scarichi industriali. Metti cinque cipolle in questi becher. Conserva le altre cinque in acqua distillata come controlli. Lascia crescere le radici per altre 24 ore.
Con bisturi o lama, preleva 5-6 punte radicali da ogni cipolla, registrando quali erano controlli e quali soggetti di test. Mantieni le radici di cipolle individuali separate in provette etichettate.
Fissa subito le punte radicali in aceto-alcol in rapporto 1:3. Metti le punte di una cipolla su vetrino e macerale in acido cloridrico 1N (1 molare) a 60°C per tre minuti. Colora le punte macerate con carbol fucsina, miscela di fenolo e fucsina basica che lega elementi nelle pareti cellulari rendendoli più visibili in microscopia ottica.
Aggiungi 2% di aceto-orceina in 4% acido acetico. Questo colora i cromosomi. Mescola con il bastoncino maceratore. Applica coprivetrino, premendo per schiacciare le punte. Sigilla i bordi con smalto unghie a rapida asciugatura o monta permanentemente in balsamo del Canada, resina dell'abete balsamico mista con oli essenziali o xilene. Numera i vetrini così i risultati saranno registrati ma non apparirà se ciascuno è soggetto di test o controllo.
Metti il vetrino sul palco del microscopio ottico. Esamina il campo a basso ingrandimento, passando a ingrandimenti maggiori per esaminare i cromosomi.
Registra le aberrazioni cromosomiche su scheda dati, per numero codificato per ogni cipolla. Includi cromosomi incompletamente separati o rotti, micronuclei (nuclei extra formati a fine divisione cellulare che possono contenere detriti cromosomici), anelli cromosomici e cromosomi appiccicosi e disturbati in diversi stadi di divisione. Fotografia ogni vetrino.
Analizza i dati usando analisi statistica. Interpreta i risultati per valutare se la soluzione di test è genotossica.
Salute ambientale