Retrovirus Protocolli Infezione

contenente un genoma RNA che è racchiusa in una busta e capside lipidico, i retrovirus contengono catene di polipeptidi che li aiutano a collegare ai recettori nelle membrane delle cellule ospiti che infettano. Considerando che l'informazione ereditaria maggior parte delle cellule è codificata nel DNA, quella dei retrovirus è contenuto in RNA; retrovirus portano anche la enzima trascrittasi inversa, che permette loro di aderire al DNA ospite. Alcuni protocolli sono seguiti da laboratori in infezione propositivo della cellula DNA con questi virus. Preparazione del Laboratorio

Alcune attrezzature di laboratorio e le forniture sono necessarie per aiutare nel processo di infezione retrovirale. L'equipaggiamento include 1 aiuto pipetta, 1 pipetta-man, 1 cappa di coltura tissutale, 37 gradi centigradi e 32 gradi Celsius incubatori, e una centrifuga Eppendorf. Forniture comprendono piastre coltura di tessuti, una pipetta Pasteur monouso, surnatante retrovirale qualificato, sterilizzata per filtrazione polibrene e sterilizzata a filtro di solfato di protamina.
Preparazione della cella per Infection

Prior di infezione, le cellule bersaglio devono essere divise in un piatto tessuto-coltura e incubate per una notte a 37 gradi Celsius incubatore con il cinque per cento di CO2. Lo scopo del periodo di incubazione è di creare cellule che sono il 50% confluenti. Preparare le cellule anticipo è necessario garantire che le cellule sono ottimizzati per il processo di infezione. Il Nolan Lab della Stanford University suggerisce che l'infezione delle cellule cominciano sempre dall'inizio infettando le cellule 3T3 NIH per ottimizzare i risultati del test.
Infettare il Cellule

Dopo il periodo di incubazione è finita, i ricercatori dovrebbero garantire che le cellule sono sani e della confluenza destra. Usare la cappa tessuto-coltura, la materia cellulare viene aspirato e un surnatante virale viene applicata alle celle. Una volta applicato, il piatto deve essere delicatamente dondolava avanti e indietro per verificare che sia distribuito uniformemente. Le cellule devono essere quindi spin-inoculati inserendoli nella centrifuga Eppendorf e li filatura a 2.500 rpm per 90 minuti a una temperatura di 30 gradi centigradi. In seguito, le cellule devono essere incubate a 32 gradi Celsius per uno o due giorni. Il virus viene poi sostituito con le cellule estratte e messo in incubatrice da analizzare ovunque da tre a sette giorni dopo l'infezione iniziale.