Cella di congelamento protocollo

Preservare le cellule tramite congelamento è essenziale per la ricerca, la medicina veterinaria e allevamento di animali, perché permette alle cellule di essere conservati per lunghi periodi di tempo. Il metodo di congelamento selezionato, tuttavia, deve ridurre o prevenire danni alla cella. L'agente crioconservazione e metodo può dipendere dal tipo di cellula. Preparazione

Le cellule devono essere congelati, quando sono sani e in attiva crescita, con una percentuale vitalità 90. Si deve prestare attenzione per la manipolazione e la centrifugazione ad alta velocità e vigorosa pipettaggio o aspirazione deve essere evitato per mantenere la vitalità e prevenire i danni cellulari.
Crioprotezione

Un agente crioprotezione è usato come una sostituzione per l'acqua intracellulare. L'agente impedisce cristalli di ghiaccio e disidratazione si verificano nelle cellule. Glicerolo sterilizzato e dimetilsolfossido sterilizzati sono spesso usati a una concentrazione del 5 per cento al 15 per cento (volume per volume) diluito in entrambi siero di vitello fetale o di mezzi di crescita, a seconda del tipo di cellula.
Congelamento e bagagli

celle della miscela refrigerante devono essere raffreddati lentamente. Se un congelatore programmabile non è disponibile, cryovials possono essere avvolti in tessuto o collocati in polistirolo, che può rallentare il processo di congelamento. Le cellule devono essere conservati a meno 80 gradi Celsius per 24 ore e poi trasferiti in azoto liquido per la conservazione a lungo termine.
Scongelamento

cellule congelati devono essere scongelati rapidamente. Un bagno d'acqua a 37 gradi centigradi può essere utilizzato. Si deve prestare attenzione con le cellule conservati in azoto liquido, tuttavia, come l'azoto liquido può entrare le fiale e può esplodere in scongelamento. La miscela frigorifera deve essere diluito in terreni di coltura. La vitalità cellulare deve essere valutata con il colorante blu tripano e le cellule coltivate in modo normale.