Metodi per misurare NADPH-ossidasi

La NADPH ossidasi è identificato come produttore di specie reattive dell'ossigeno durante processi tra cui la crescita delle cellule muscolari lisce vascolari. Queste specie reattive sono legati a una serie di malattie tra cui l'ipertensione, diabete, cancro e infiammazione; metodi per monitorare l'attività di questo enzima è fondamentale l'eventuale sviluppo trattamento. NADPH ossidasi

NADPH ossidasi appartiene ad una famiglia di enzimi che aiutano con trasferimento di elettroni tra NADPH e ossigeno. Tuttavia, NADPH ossidasi ha la capacità unica di produrre specie reattive dell'ossigeno da questa reazione, rispetto ad altri membri della famiglia in cui le specie reattive dell'ossigeno viene generato tramite altri mezzi. Un multimerica proteina complessa, NADPH ossidasi è costituito dal flavocytochrome di membrana b558, che viene utilizzato come marcatore di misura.
Specie reattive dell'ossigeno (ROS)

la principale fonte di ROS, in particolare il perossido di idrogeno, NADPH ossidasi produce piccoli ma costanti quantità tramite la sua isoforma espressa nei vasi sanguigni, che sono coinvolti nei processi di segnalazione. Questa produzione coerente può finalmente travolgere il sistema antiossidante naturale, causando una perdita di composti protettivi come l'ossido nitrico, e la generazione di ancora più potente ROS.
Chemiluminescence Metodo

chemiluminescenza> abilita altamente sensibile, misura automatizzata di ossidasi NADPH su una gamma di concentrazioni. Durante questo metodo, viene aggiunto NADPH substrato ad un campione di tessuto contenente ossidasi NADPH. Per reazione, ROS è generato e reagisce con il composto lucigenina per produrre un effetto chemilluminescent, che viene misurata. Luminescenza è direttamente proporzionale alla NADPH ossidasi, come l'enzima determina la velocità di reazione.
Analisi cinetica tramite Citometria a Flusso

In questo metodo, i campioni di tessuto vengono analizzati mediante citometria a flusso. Midollo osseo è separato dal campione utilizzando soluzione salina bilanciata Hanks '. Macchie e anticorpi specifici rilevamento vengono aggiunti al campione in provette di polistirene. Il campione viene quindi incubato, lavata con soluzione salina bilanciata Hanks ', etichettato con sonde molecolari e preparato dalla citometria a flusso. Tubi di controllo sono anche per il confronto e per calibrare citofluorimetro. La macchina è poi corse e misure registrate.