Test Microtox®: saggio bioluminescenza batterica per screening rapido tossicità
Il test Microtox® è un bioassay in vitro standardizzato, rapido (5-30 min), usando batterio marino Vibrio fischeri (ceppo NRRL B-11177) per valutare tossicità acuta.
Principio
- V. fischeri bioluminesce naturalmente (reazione luciferasi).
- Tossici inibiscono attività metabolica → output luce diminuisce.
- % inibizione vs controllo = misura tossicità.
- EC50 (concentrazione effettiva causando 50% perdita luce) calcolato.
Protocollo
- Ricostituire batteri liofilizzati.
- Esporre a diluizioni campione + controllo diluente.
- Incubare a 15°C (standard).
- Leggere luminometro a 5, 15, 30 min.
- Software calcola EC50, intervalli confidenza.
Applicazioni
- Screening effluenti acqua/acque reflue.
- Classificazione tossicità chimici/prodotti.
- Acqua interstiziale sedimenti, lisciviati suolo.
- Eventi contaminazione acqua potabile.
- Controllo processo (industriale).
Vantaggi
- Veloce, basso costo, piccolo volume campione.
- Ampia sensibilità (organici, inorganici, metalli pesanti).
- Standardizzato (ISO 11348, ASTM D5660).
- Strumento portatile (Microtox® M500, FX).
Limitazioni
- Sistema batterico ≠ tossicità mammiferi/umana.
- Non identifica tossico specifico.
- Interferenze: colore, torbidità, volatilità, pH, salinità (aggiustamenti necessari).
- Non per endpoint cronici/sublethali.
Uso regolatorio
Strumento screening; non endpoint regolatorio standalone. Complementa analisi chimiche specifiche e bioassay higher-tier (dafnia, pesci).