Elettroforesi su Gel: Preparazione del Campione - Guida Passo-Passo
Principio
L'elettroforesi su gel separa molecole (proteine, acidi nucleici) per dimensione/carica in una matrice porosa (gel). Il DNA, polielettrolita, migra in base alla lunghezza. I gel più comuni: poliacrilammide (proteine, piccoli frammenti DNA) e agarosio (DNA/RNA di maggiori dimensioni).
Materiale Necessario
- Soluzione del campione
- Soluzione standard (peso molecolare noto)
- Soluzione tampone (buffer) a pH ottimale
- Mezzo gelificante (poliammide, agarosio, polisaccaridi)
- Colorante di tracciamento (tracking dye) + glicerolo
Procedura
- Preparare campione e standard.
- Preparare buffer con pH vicino a quello del campione.
- Preparare il gel (poliammide, agarosio, ecc.) e farlo solidificare tra i due compartimenti degli elettrodi (anodo/catodo a seconda della carica degli analiti).
- Con micropipetta, caricare campioni e standard nei pozzetti (wells) preformati sul gel.
- Aggiungere glicerolo e colorante di tracciamento al campione: il glicerolo aumenta la densità, impedendo la diffusione nel buffer superiore.
- Avviare l'elettroforesi applicando tensione.