Salute e malattia
ELISA, o saggio immunoenzimatico legato a enzima, è una tecnica di laboratorio biologico usata per rilevare la presenza di un antigene o anticorpo. È spesso usata in diagnosi medica per determinare se un paziente è stato esposto a un particolare tipo di infezione.
Per eseguire un ELISA, il campione - contenente l'antigene di interesse - viene ancorato a un supporto solido in una piastra. Una soluzione con l'anticorpo complementare viene aggiunta alla piastra, e l'anticorpo si lega all'antigene. L'anticorpo in eccesso viene poi lavato via, lasciando solo le coppie antigene-anticorpo legate nella piastra. Questi possono essere visualizzati aggiungendo una molecola fluorescente che si lega all'anticorpo e emette un segnale visivo, che può poi essere quantificato. In questo modo, la presenza e la quantità dell'antigene di interesse possono essere determinate indirettamente.
Un Western blot è un tipo diverso di tecnica usata per rilevare una proteina specifica in un campione e determinarne la dimensione. Prima, le proteine del campione vengono separate per dimensione su un gel usando l'elettroforesi su gel. A questo punto, le proteine non sono visibili a occhio nudo. Gli scienziati poi trasferiscono le proteine su una membrana e aggiungono una soluzione contenente l'anticorpo per l'antigene di interesse. Dopo aver lavato via la soluzione in eccesso, l'anticorpo è legato all'antigene sulla membrana.
L'aggiunta di un anticorpo secondario fa emettere luce all'anticorpo originale, o primario. Quantificare la quantità di luce emessa permette ai ricercatori di determinare la presenza dell'antigene, la sua dimensione rispetto ad altre proteine e la sua concentrazione relativa.
L'immunoistochimica è una tecnica che permette ai ricercatori di visualizzare la posizione di una proteina in un campione di tessuto. Piccole fette di un campione vengono preparate e viene aggiunto un anticorpo primario, che si lega all'antigene di interesse. La soluzione in eccesso viene lavata via prima che i ricercatori aggiungano un anticorpo secondario. Questo anticorpo si lega alla coppia anticorpo primario-antigene ed emette luce, segnalando la posizione dell'antigene di interesse.
Gli scienziati usano un microscopio per visualizzare dove si trova l'antigene nella cellula. Anticorpi diversi, ciascuno specifico per una particolare proteina, possono essere usati per determinare la posizione relativa di diverse molecole in una cellula. Se questo è l'obiettivo, anticorpi secondari di diversi colori vengono usati per distinguere tra le diverse molecole di interesse.
La separazione cellulare attivata da fluorescenza - o FACS - è un tipo di citometria a flusso usata per separare diversi tipi di cellule in una soluzione. Ogni diverso tipo di cellula viene "etichettato" con un anticorpo specifico per quel tipo di cellula. Ognuno di questi anticorpi emette un colore diverso di luce. Una macchina agita la soluzione per spezzarla in gocce individuali e usa un sensore per rilevare il colore di ogni goccia. La macchina separa le cellule per colore emesso, dividendole in base al tipo di proteina che contengono. La metodologia FACS permette ai ricercatori di separare e quantificare le cellule di interesse per le loro domande di ricerca.
La microscopia elettronica normale permette agli scienziati di esaminare la struttura di una cellula ingrandita fino a 1 milione di volte. L'immuno-microscopia elettronica usa le proprietà del legame anticorpo-antigene per visualizzare proteine particolari in sezioni di tessuto molto sottili. Prima, anticorpi con particelle d'oro attaccate sono lasciati legare all'antigene di interesse. Un microscopio elettronico poi visualizza le particelle d'oro, dando ai ricercatori un'immagine di dove la proteina è localizzata nella cellula.
Anche se l'immuno-microscopia elettronica è semplice in teoria, è tecnicamente difficile e molto costosa da impiegare, limitandone la popolarità d'uso in molti programmi di ricerca biologica.
Settore sanitario (generale)