Misurazione dell'espressione proteica: metodi e tecniche
La misurazione dell'espressione proteica può fornire indizi sulle attività dei geni nel corpo, poiché le proteine funzionano come catalizzatori finali delle attività cellulari. Tuttavia, secondo un articolo del numero di marzo 2010 di "LabMedicine", patologi e biologi non concordano ancora su quale sia il metodo più adatto tra microscopia a campo chiaro o a fluorescenza per misurare l'espressione proteica. La scansione a campo chiaro di interi vetrini non solo è facile da usare e fornisce stabilità del cromogeno, ma può proteggere i vetrini di vetro più a lungo.
Occorrente
- Tessuto cellulare
- Vetrino
- Anticorpo secondario biotilato
- Streptavidina-perossidasi di rafano
- 3,3'-Diaminobenzidina
- Telecamera a scansione lineare a colori
Istruzioni
- Posizionare il tessuto cellulare su un vetrino e aggiungere un anticorpo secondario biotilato, seguito da streptavidina-perossidasi di rafano e attendere due minuti.
- Versare quattro gocce di 3,3'-diaminobenzidina sul campione e attendere due minuti perché la macchia marrone si diffonda completamente sul campione.
- Posizionare una sezione istologica del campione colorato su una piattaforma motorizzata in una stanza ben illuminata. Regolare attentamente la telecamera a scansione lineare a colori a ingrandimento 20X o 40X e scansionare il campione. Allineare le strisce dell'immagine e comprimere l'immagine digitale in una dimensione di file leggibile.
- Stampare l'immagine digitale per analisi manuale o inserirla in software per analisi assistita. Osservare il pattern delle macchie come presentato nell'immagine. Analizzare attentamente l'espressione proteica basandosi sui pattern delle macchie sul campione.
- Valutare l'espressione proteica su cellule tumorali e stroma esaminando la concentrazione di proteina espressa sul tessuto cellulare.
- Usare i pattern di colore per quantificare l'espressione proteica in una scala da 0 a 3+. Usare il punteggio per calcolare l'HER-score o l'Allred score.