Salute e malattia
Gli enzimi amilasi sono prodotti nel pancreas e nelle ghiandole salivari e aiutano a digerire e processare i carboidrati. Quando il pancreas si ammala, l'amilasi viene rilasciata nel flusso sanguigno. Quando un paziente sta vivendo problemi al tratto digestivo o c'è malattia del pancreas, un medico ordinerà un esame del sangue per stabilire il livello di amilasi nel sangue. Il monitoraggio dei livelli enzimatici di amilasi fornirà molte informazioni sulla progressione della malattia e sugli effetti del trattamento.
Accendi lo spettrofotometro e impostalo su una lunghezza d'onda di 620 nm. Lascia riscaldare lo strumento per un minimo di 10 minuti affinché la risposta sia stabile durante l'esperimento.
Prepara sei provette, etichettale 1-6 e mettile in un porta provette. Disponi le soluzioni di amido, acqua deionizzata e soluzione KI/iodio sul banco.
Riempi la provetta 1 con 3 ml di acqua deionizzata usando una pipetta; questo servirà come bianco. Riempi le provette 2-6 con 3,0 ml, 2,9 ml, 2,7 ml, 2,4 ml e 2,1 ml di acqua deionizzata rispettivamente. Aggiungi soluzione di amido a ciascuna delle provette 2-6 nel seguente ordine: provetta 2 riceve 0 ml, provetta 3 riceve 0,1 ml, provetta 4 riceve 0,3 ml, provetta 5 riceve 0,6 ml e provetta 6 riceve 0,9 ml.
Aggiungi una goccia di soluzione KI/iodio a ciascuna delle sei provette. Mescola accuratamente ogni provetta prima di registrarne l'assorbanza nello spettrofotometro.
Riempi la cuvetta con la soluzione bianco, pulisci l'esterno della cuvetta e mettila nel foro bianco dello spettrofotometro. Regola l'assorbanza a zero. Tutte le altre soluzioni daranno un'assorbanza positiva.
Riempi la cuvetta del campione con ciascuna delle altre cinque soluzioni a turno. Pulisci l'esterno della cuvetta prima di ogni misurazione. Registra il valore di assorbanza per ogni provetta. Risciacqua la cuvetta con la nuova soluzione almeno una volta prima di riempirla per il test.
Crea un grafico che tracci le letture di assorbanza contro la concentrazione di amido. Questa è la curva standard che ti permette di determinare la concentrazione di una soluzione che ha una data lettura di assorbanza.
Pulisci tutte le provette dalla prima parte del test. Conserva la provetta bianco per uso successivo.
Ottieni un campione di sangue dal paziente. Metti il campione in una centrifuga e separa i globuli rossi dal plasma sanguigno.
Riempi una provetta con 9 ml di acqua deionizzata e 1 ml di plasma sanguigno. Questa è una diluizione 1:10 del plasma. Mescola accuratamente la provetta e pipetta 1 ml della soluzione in una seconda provetta. Etichetta le due provette con il loro contenuto.
Preparati a eseguire un test cronometrato. Tieni un cronometro a portata di mano e prepara sette provette con cuvette nel porta provette. Prenderai letture ogni due minuti una volta iniziato il test. Registra l'ora esatta e la lettura di assorbanza per ciascuno dei sette punti dati. Riempi ciascuna delle sette provette con 2 ml di acqua deionizzata.
Aggiungi 9 ml di soluzione di amido alla provetta che ha 1 ml di diluizione 1:10 del plasma. Non appena inizi ad aggiungere la soluzione di amido, avvia il cronometro. Mescola bene la provetta e pipetta 1 ml della soluzione amido/plasma nella prima delle sette provette. Registra l'ora. Aggiungi 1 goccia di soluzione KI/iodio alla provetta e mescola.
Trasferisci nella cuvetta, pulisci l'esterno e registra l'assorbanza. Ripeti il processo con le restanti sei provette a intervalli di due minuti. Alla conclusione del test cronometrato dovresti avere letture per l'ora effettiva e l'assorbanza per gli intervalli di 0, 2, 4, 6, 8, 10 e 12 minuti.
Usa la curva standard per trovare la concentrazione di amido per ciascuno dei sette punti dati. Questi punti diminuiranno col tempo. L'amilasi digerisce l'amido e col tempo consuma tutto l'amido disponibile.
Traccia i punti dati per il test cronometrato come concentrazione di amido versus tempo. La pendenza di questa curva indica la quantità di amilasi nel campione di plasma.
Settore sanitario (generale)