Cloramfenicolo: Proprietà, Usi e Sicurezza in Ricerca
Il cloramfenicolo è un antibiotico ad ampio spettro che uccide i batteri interferendo con la loro replicazione. Sviluppato inizialmente per infezioni umane, secondo Drug.com è oggi usato solo come extrema ratio per gravi effetti collaterali: anemia aplastica, ipoplastica, trombocitopenia, granulocitopenia.
In laboratorio di ricerca è utile per biologia molecolare. Preparato su piastra, permette di rilevare concentrazioni batteriche o isolare ceppi specifici per esperimenti successivi.
Occorrente per Preparazione Piastre LB + Cloramfenicolo
- Acqua distillata
- Cloramfenicolo
- Triptone 1,0%
- Estratto di lievito 0,5%
- Cloruro di sodio (NaCl) 1,0% pH 7,0
- Etanolo 95%
- Agar
- Matraccio 2 L
- Agitatore magnetico + stir bar medio
- Guanti lattice/nitrile
- Bilancia da laboratorio
- Autoclave
- 30 piastre sterili 10 cm
- Pennarello blu
- Parafilm
- Carta alluminio
- Nastro per autoclave
Procedura
- Indossa guanti per preparare il brodo LB (Lysogeny/Luria broth), terreno di coltura batterica. Si può fare da zero o acquistare pronto.
- Pesa su carta da pesata (tara): 10 g triptone, 5 g lievito, 10 g NaCl, 15 g agar. Usa la carta piegata come imbuto per versare nel matraccio.
- Inserisci stir bar, centra su agitatore magnetico. Aggiungi acqua distillata fino a 1 L.
- Accendi agitatore: velocità moderata, stir bar non deve incastrarsi. Lascia sciogliere tutto.
- Spegni. Copri con parafilm (3×3 cm), poi carta alluminio, poi nastro autoclave.
- Autoclave: ciclo liquidi, 20 min, 15 psi (≈1 bar) per sterilizzare.
- Rimuovi (attenzione: bollente!). Raffredda a ~55°C (a temperatura ambiente o in bagno maria a 65°C).
- Disinfetta piano di lavoro con etanolo 95%. Cambia guanti.
- Marchia lato e coperchio di ogni piastra con banda verticale blu (indica LB + cloramfenicolo).
- Aggiungi cloramfenicolo alla concentrazione finale desiderata (es. 100 µg/mL: 1 mL stock 25 mg/mL). Mescola a vortice o 1-2 min su agitatore.
- Pulisci imboccatura con etanolo. Versa nelle piastre fino a metà. Fai solidificare, copri, conserva capovolte a 4°C per non seccare.
Sicurezza: cloramfenicolo è tossico per midollo osseo. Maneggia sempre in cappa, con DPI completi. Smaltisci rifiuti come da normative per farmaci pericolosi.