Acido Dinitrosalicilico (DNSA): Applicazioni e Protocollo per Analisi Zuccheri
Principio e Impieghi
Il DNSA (3,5-dinitrosalicilico) è un reagente colorimetrico per dosare zuccheri riduttori (glucosio). Usato per glicemia (sangue, liquor), laboratori diabetologici. Vantaggi: 10 min, reagenti stabili/economici/facili. Glicemia = marker metabolico (iperglicemia/diabete).
Materiali Necessari
- DNSA 17,5 g
- Acqua distillata 60°C 1000 ml
- Carta da filtro, imbuto
- Soluzione glucosio 1% in acido benzoico saturo
- Contenitore tappato >100 ml
- Fenolo 13,8 g
- Bisolfito sodico 13,8 g
- NaOH 10% 350 ml
- Tartrato potassio-sodico 510 ml
- Acqua temperatura ambiente 180 ml
- Pipette 0,1 / 0,2 ml
- Bagno maria bollente
- Strumentazione riscaldamento/misura microlitri
Procedura Standard (Metodo Lee)
- Reagente A: Sciogli DNSA in acqua calda 60°C, mescola, filtra, conserva 25°C.
- Soluzione Glucosio-DNSA: 1% glucosio in acido benzoico + 100 ml Reagente A 1,75%. Mescola (inversione contenitore), 25°C.
- Reagente B: Fenolo + bisolfito in NaOH 10% 350 ml → aggiungi tartrato in acqua 180 ml → filtra → temperatura ambiente.
- Prelievo: Puntura capillare, pipetta 0,1 ml (più accurato per 0,1 ml) o 0,2 ml sangue.
- Incubazione: Sangue in soluzione Glucosio-DNSA (rapporto 1:20). Mescola su/giù pipetta per omogeneizzare. Lascia precipitare 1-2h, rimuovi precipitato.
- Sviluppo colore: Sopranatante + volume uguale Reagente B → bagno maria bollente ≥3 min.
- Lettura: Confronta colore rosso sviluppato con standard glucosio noto.
Nota: metodo storico/laboratoristico; oggi sostituito da glucometri enzimatici/elettrochimici per routine clinica.