Salute e malattia
La biotinilazione è il processo di legare la biotina (vitamina H) a una proteina o altre molecole. Procedura scientifica usata in biotecnologia e biologia molecolare per ricerca su DNA, proteine, antigeni (molecole che il sistema immunitario riconosce come invasori). Protocolli: biotinilazione di anticorpi e peptidi, biotinilazione di superficie cellulare.
Per legare biotina a proteine anticorpali (prodotte quando un antigene entra nel corpo), i tecnici usano: bicarbonato di sodio (NaHCO₃) a pH 9; dimetil solfossido (DMSO); NHS-Biotina; soluzione salina PBS. Campioni mescolati con bicarbonato, poi aggiunto a NHS-Biotina in DMSO. Soluzione aggiunta agli anticorpi analizzati e incubata su rotatore 4 ore a temperatura ambiente o overnight a 4°C (39,2°F). Infine, diluizione con PBS.
Protocollo: coltura tessuti, PBS fosfato-tampone a pH 7.4, soluzione tampone sulfosuccinimidil-2-(biotinamido)etil-1,3-ditiopropionato per bilanciare acidità contenente gruppi amminici e Tris-Cl (secondo Current Protocols in Protein Science). Cellule mescolate con biotina e soluzione tampone, decantate, centrifugate. Contenuto solido e proteine specifiche analizzate su gel elettroforesi.
Reagente: NHS-SS Biotina (secondo Philip Shepherd, "Monoclonal Antibodies: A Practical Approach"). Peptidi = brevi frammenti di acidi amino (costituenti proteine e DNA). Protocollo: soluzione commerciale NHS-SS Biotina sciolta in acqua. Aggiunto campione peptidico con bicarbonato per bilanciare pH. Incubazione su ghiaccio 2 ore. Osservazione campione con o senza molecole di biotina.
Disturbi del sistema immunitario