Differenza tra ELISA diretto e indiretto

Un test immunoenzimatico (ELISA) comporta la reazione di un complesso anticorpo-enzima con un antigene o anticorpo tenuto immobile su una superficie solida. Sulla incubazione dell'enzima coniugato con un substrato adatto, un prodotto è formato. La formazione di un prodotto consente di rilevare la presenza dell'antigene o dell'anticorpo e la sua quantità fornisce una misura della quantità di reazione antigene-anticorpo che si è verificato. Il test ELISA può essere eseguito in due forme: diretta e indiretta. Prova Format

Nel test ELISA diretto, un anticorpo primario si svolge sulle pareti della micropiastra. Quando il campione sospettato di contenere l'antigene viene aggiunta, vi è una reazione antigene-anticorpo. Successivamente, viene aggiunto un anticorpo secondario legato a enzima che è in grado di reagire con l'antigene. Se l'antigene è presente nel campione, si lega a questo anticorpo enzimatico. Quando viene aggiunto un substrato incolore, se un colore sviluppa, indica la presenza di antigene. Nel test ELISA indiretto, antigene si svolge sulle pareti della micropiastra. Quando un campione sospettato di contenere anticorpi si aggiunge, la reazione antigene-anticorpo si verifica. Successivamente, viene aggiunto un anticorpo secondario legato a enzima capace di reazione con la regione dell'anticorpo non legato. Quando si aggiunge il substrato incolore, si porta a sviluppo di colore se il campione utilizzato contiene anticorpi.
Facilità di test

Una vasta gamma di anticorpi secondari marcati sono commercialmente disponibili. Inoltre, è possibile creare diversi anticorpi primari in una determinata specie e utilizzare lo stesso anticorpo secondario per il rilevamento. Questo rende il test ELISA indiretto facile da eseguire. Nel ELISA diretto, gli anticorpi primari devono essere specificatamente predisposta per reagire con l'antigene specifico che potrebbero essere presenti nel campione. Questo rende la diretta ELISA svantaggioso rispetto al test indiretto.
Rapidità di test

Il test ELISA diretta è veloce in confronto al test indiretto perché utilizza solo un singolo anticorpo. Il test ELISA indiretto richiede un ulteriore passaggio di incubazione con un secondo anticorpo durante la procedura di prova, che provoca un ritardo nel conseguimento di risultati.
Sensibilità

Il test ELISA è diretto meno sensibile della forma indiretta della prova perché c'è molto meno amplificazione del segnale. Inoltre, l'etichettatura dell'anticorpo primario con un enzima può ridurre il suo profilo di immonoreactivity. In caso di ELISA indiretto, l'anticorpo primario non è etichettato e pertanto, conserva la sua immunoreattività. Inoltre, ogni anticorpo primario ha molti epitopi che possono legarsi con l'anticorpo secondario, ciò consente l'amplificazione del segnale, migliorando la sensibilità del metodo. Tuttavia, vi è una possibilità di reattività crociata tra antigene e l'anticorpo secondario, portando ad un errore nei risultati. Non esiste una possibilità nel metodo ELISA diretto.