Il protocollo TMRE

Tetramethylrhodamine etilico (TMRE) è un "lento, lipofila, colorante cationico reditribution fluorescente" utilizzato nella TMRE /TMRM membrana mitocondriale potenziale Kit Assessment MitoPT ™, prodotto da Immunochemistry Technologies, LLC. Il processo consente di visualizzare un gradiente di potenziale elettrico transmembrana in cellule. Preparazione del saggio

Il protocollo è semplice da seguire, e impiega circa 20 minuti per elaborare a 37 gradi centigradi. Le cellule viventi usare nel saggio possono comparire tra diverse ore e diversi giorni per preparare all'uso. Le cellule di controllo può richiedere diverse ore per la preparazione, in quanto hanno bisogno di essere indotta a subire apoptosi.
Protocol Parte 1
cellule Cultura

ad una densità ottimale per apoptosi o induzione di stress ossidativo, secondo il protocollo di induzione specifica, ma non superiore a 10 (6) cellule /mL.
protocollo Parte 2

Allo stesso tempo, la cultura di una popolazione di cellule di controllo negativo non-indotta (presso la stessa densità della popolazione indotto.
protocollo Parte 3

indurre apoptosi o volutamente depolarizza la seguente mitocondri il vostro protocollo desiderato.
protocollo Parte 4

Preparare 1X Assay /tampone di lavaggio.
Protocollo Parts 5-8

Preparare il di 1 mm o 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM magazzino. Per Protocollo Parte 6, Preparare una diluizione 1:100 di 1 mm, oppure una diluizione 1:20 del 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM soluzione per chiodare in campioni di colture cellulari.

protocollo Parte 7, cellule macchia con una concentrazione finale 20-200 Nm di MitoPT ™ soluzione TMRE /TMRM.

protocollo Parte 8, analizzare la dati.