Biotinylation Protocolli

Biotinilazione è il processo di collegamento biotina, o vitamina H, ad una proteina o di altre molecole. Questa procedura scientifica è usato soprattutto nel campo delle biotecnologie e della ricerca di biologia molecolare che coinvolgono il DNA, le proteine ​​e gli antigeni, molecole del sistema immunitario riconosce come invasori. Protocolli biotinylation comprendono la biotinilazione di anticorpi e peptidi, così come biotinylation superficie cellulare. Biotinilazione di Anticorpi

Per creare un collegamento biotina alle proteine ​​anticorpi producono quando un antigene entra nel corpo, i tecnici di utilizzare il bicarbonato di sodio (NaHC03) a pH 9, dimetilsolfossido (DMSO);

SSN -biotina e una sostanza salina chiamato PBS. Campioni vengono mescolati con bicarbonato di sodio, che viene successivamente aggiunto al NHS-biotina in DMSO. La soluzione viene quindi aggiunta agli anticorpi analizzati e incubata su un apparecchio chiamato un rotatore per quattro ore a temperatura ambiente o per una notte a 39.2 gradi Fahrenheit. Infine, la soluzione viene diluita con PBS.
Cellulare superficiale Biotinilazione

Nel protocollo biotinilazione superficie cellulare, i tecnici usano colture di tessuti, soluzione salina tampone fosfato (PBS) a pH 7,4 e Sulfosuccinimidil-2-(biotinamido) etil-1 ,3-soluzione tampone dithiopropionate per bilanciare l'acidità contenenti gruppi amminici e TrisCl, secondo Current Protocols in cellule Science.The Proteine ​​sono mescolati con la biotina e la soluzione tampone, decantato e centrifugati . Contenuto solido e proteine ​​specifiche sono successivamente analizzati su un piatto elettroforesi su gel.
Biotinilazione di Peptidi

Per eseguire la biotinilazione di peptidi, il reagente utilizzato è NHS SS-biotina, secondo Philip Shepherd in "Anticorpi monoclonali: A Practical Approach". I peptidi sono brevi frammenti di amminoacidi, le molecole che formano le proteine ​​e il DNA. In questo protocollo, la soluzione commerciale NHS-SS biotina è disciolto in acqua. Successivamente viene aggiunto il campione peptide ad esso, insieme con bicarbonato di sodio per bilanciare l'acidità o pH. La soluzione viene quindi incubata su ghiaccio per due ore. I tecnici possono osservare il campione, con o senza le molecole di biotina.