TPA Purificazione Protocolli

tissutale del plasminogeno o TPA è un tipo di serina proteasi, che è una proteina in grado di distruggere i coaguli di sangue. TPA si trova nelle cellule che rivestono internamente i vasi sanguigni. TPA protocolli sono parte della ricerca farmaceutica e medica sul ictus, così come le malattie cardiache e polmonari, come l'embolia polmonare e infarto miocardico. TPA purificazione riguarda l'isolamento di questa proteina da altre molecole attraverso una serie di processi, compresi cromatografia ed elettroforesi. Purificazione di TPA da Hog Kidney

Questo protocollo è usato in studi di fibrinolisi, il processo di rottura del prodotto della coagulazione chiamata fibrina, legati alla formazione di tumori. Tecnici estraggono TPA dal rene hog acetone-secche con tampone acetato di potassio, a pH 4.2. Poi, aggiungono solfato di ammonio per indurre la precipitazione cella. Essi aggiungono n-butil-sefarosio ai campioni, che vengono poi analizzate su un cromatografo. Concanavalina A è aggiunto anche e chromatograph.y per separare diverse proteine ​​viene eseguita.
Purificazione di TPA di ovaio di criceto cinese e di cellule di E. coli

purezza Protein è un fattore importante per il successo di esperimenti biologici. Purificato TPA è anche disponibile in commercio, risparmiando tempo ed evitando il rischio di compromettere il dell'esperimento causa mal soluzione purificata. Questo protocollo comporta i processi di purificazione di TPA nei mammiferi e cellule batteriche. Tecnici precipitano campioni di cellule, filtrato e di eseguire affinità e analisi cromatografia su gel. Più tardi, si analizzano e confrontano i risultati, prima della produzione commerciale.
Espressione di attivo TPA umana in E. coli

lisati cellulari purificati vengono aggiunti una lisina - colonna Sepharose, analizzata in un cromatografo e lavato con una soluzione di cloruro di sodio. Altro campione viene caricato su una seconda colonna cromatografica contenente proteine ​​che si lega a TPA con un'affinità molto elevata. Un campione dalla seconda colonna viene miscelato con una soluzione di zinco-sefarosio. La proteina risultante mostra più del 90 per cento di purezza, secondo la rivista "Applied and Environmental Microbiology".