N Terminal Sequencing protocollo

degradazione di Edman - un processo ben noto per identificare l'amminoacido N - terminale di una proteina - richiede scissione degli aminoacidi , seguita da identificazione mediante cromatografia o elettroforesi . Processi automatizzati accelerano sequenziamento N -terminale . I fatti

proteine ​​prodotte all'interno di singole cellule agiscono come ormoni , enzimi e altre importanti autorità di regolamentazione . Mutazione genetica con conseguente una proteina anomala potrebbe avere gravi conseguenze per la salute .
Processo

L'aminoacido N - terminale è scisso dal trattamento con uno dei vari reagenti , poi idrolizzato per formare un amminoacido separata . Cromatografia su strato sottile , HPLC o elettroforesi determina la dimensione della amminoacido , e lo confronta con un formato standard noto . Il nuovo N-terminale della proteina rimanente può essere scisso in modo simile per l'identificazione .

Automazione

Applied Biosystems ha portato allo sviluppo di automatizzare degradazione Edman , che lega una proteina purificata ad una membrana e la tratta con phenylisothiocyanate . Il aminoacido libero iniettato automaticamente in un sistema HPLC per l'identificazione.

Complicazioni

Proteine ​​deve rimanere relativamente puro e privo di contaminanti per determinare con precisione l'amminoacido N -terminale . Edman limiti di degrado richiedono grandi molecole proteiche frammentati in piccole catene peptidiche non più di 50 aminoacidi .