Placca Metodo Assay

Un saggio è una tecnica utilizzata per isolare e purificare virus e per determinare i titoli virali ( la più bassa concentrazione di virus che provoca l'infezione ) . Un saggio di placca , originariamente chiamato un test virologico , è stato sviluppato per misurare e contare l'infettività dei batteriofagi . Secondo Biologia - Online.org , fu poi applicato anche a contare i virus dei mammiferi . I fatti

Una targa è una confluenti , cultura monostrato di cellule . Si forma a seguito di infezione di una delle celle di una singola particella virale , secondo Biologia - Online.org . Quando la cellula è infettata , il virus si replica e infine uccide la cellula . Inoltre , le particelle virali di recente replicati diffuse , infettare e uccidere le cellule vicine .
Funzione

In un saggio di placca , la cultura viene prima colorato con un particolare colorante . Questo die macchie solo vitali ( dal vivo ), le cellule , secondo Biologia - Online.org . Come risultato , le cellule morte appaiono senza macchia nella cultura , contro il fondo tinta . Attualmente , il saggio di placca è applicata per rilevare le cellule che producono anticorpi che distruggono gli eritrociti da emolisi .

Caratteristiche

eritrociti sono cellule (chiamate anche globuli rossi ) che contengono una emoglobina e il trasporto di ossigeno e anidride carbonica nel sangue , dai polmoni e nei tessuti . L'emolisi si verifica quando gli eritrociti rompono e rilasciano emoglobina , secondo Biologia - Online.org . Come risultato , nel saggio placca, la base è chiara la placca e indica che i globuli rossi sono stati emolizzati dagli anticorpi .
Metodo Parte I

Ten diluizioni di uno stock di virus sono preparati prima di eseguire un saggio di placca e aliquiots 0,1 ml sono messo ai monostrati cellulari . Questa miscela è incubata per un periodo di tempo in modo che il virus abbia il tempo di attaccare le cellule . Inoltre , i monostrati sono coperti da un mezzo nutriente contenente una sostanza ( di solito agar ) , secondo "Rilevare Virus: Un Plaque Assay" di Vincent Racaniello . Il terreno nutriente forma un gel e dopo la coltura viene incubata , le cellule infettate originali MR progenie virale . Il gel limitare la diffusione del virus alle cellule circostanti , e di conseguenza , la particella infettiva produce una zona circolare chiamato placca . Con il tempo , la placca cresce a una dimensione visibile ad occhio nudo e coloranti sono utilizzati per migliorare la visione .
Metodo Parte II

Il titolo virale è calcolato in unità formanti placca , chiamati PFU , per millilitro . Essi vengono contate e , per errore minimizzato , piatti unici che contengono tra 10 e 100 placche sono contati . Inoltre, secondo " il rilevamento di virus : una targa del saggio ," per ogni 100 placche contati lo stesso titolo può variare di più o meno il 10 per cento . Pertanto, l'errore stimato di un saggio di placca è di circa il 10 per cento , quando eseguita correttamente .