Cell Lysis protocollo per Protein Isolation

piccole proteine ​​può essere preparato sinteticamente , ma per vari motivi non esiste un meccanismo sintetico migliore della cella stessa . Tipicamente , il primo passo per isolamento delle proteine ​​è la lisi cellulare . Cell Lysis
In lisi cellulare , la membrana intorno alle rotture cellulari.

La parola " lisi " deriva da una radice greca che significa "sciogliere ". In lisi cellulare , le forze che tengono la membrana cellulare insieme sono interrotte, causando la rottura. Il contenuto della cella vengono poi rilasciati nella soluzione circostante, compresa la proteina di interesse . Solitamente questo viene fatto con l'aggiunta di una soluzione chimica chiamata tampone di lisi .
Preparazione Lysis Buffer
La scelta di tampone di lisi dipenderà dal tipo cellulare , la proteina e l'applicazione .

Una miriade di diverse soluzioni di lisi sono disponibili in commercio , o ricette comuni può essere utilizzato per preparare un tampone di lisi da sostanze chimiche comuni . La migliore buffer da utilizzare varia a seconda del tipo cellulare utilizzato , la proteina da isolare e l' applicazione finale , ma , in generale , una soluzione di lisi contiene una molecola di detergente (spesso NP - 40 o Triton - X) che dissolve la cella membrana , insieme con tamponi , chelanti e inibitori della proteasi per impedire la proteina venga danneggiato , una volta rilasciati dall'ambiente protettivo della cellula .

lysis Condizioni
Performing lisi sotto condizioni del ghiaccio - freddo impedisce danni alla proteina di interesse .

Lysis buffer viene solitamente utilizzato ghiacciata , e il processo di lisi è lasciata procedere in condizioni di freddo . La soluzione è leggermente scosso per incoraggiare dispersione uniforme delle cellule e prodotti di lisi . Dopo circa 5 a 10 minuti , la soluzione di lisi è solitamente neutralizzato per impedire ulteriore attività. Queste precauzioni ridurre i danni alle proteine ​​e ridurre quantità di detriti estranei prodotto che poi devono essere rimossi .
Altri Lysis metodi
forza meccanica può anche essere utilizzato per la lisi delle cellule .

Sebbene lisi chimica è il più delicato e più comunemente usato , metodi meccanici più severe per lisare le cellule possono essere usate in alcuni casi . Questi includono sonicazione , ripetuti cicli di gelo - disgelo e di omogeneizzazione , che è un processo di mashing . Consultare la letteratura tecnica per individuare il metodo più appropriato per il caso specifico .