Differenza tra diretta e indiretta ELISA

Un saggio immunoenzimatico ( ELISA ) comporta la reazione di un complesso anticorpo - enzima con un antigene o anticorpo tenuto immobile su una superficie solida . Sulla incubazione dell'enzima coniugato con un substrato adatto , un prodotto è formato. La formazione di un prodotto consente di rilevare la presenza di antigene o anticorpo e la sua quantità fornisce una misura della quantità di reazione antigene - anticorpo che si è verificato . Il test ELISA può essere eseguito in due forme : diretti e indiretti. Formato test

Nel test ELISA diretto , un anticorpo primario si svolge sulle pareti della micropiastra . Quando viene aggiunto il campione sospettato di contenere l'antigene , c'è una reazione antigene - anticorpo . Successivamente, viene aggiunto un anticorpo secondario legato a enzima che è in grado di reagire con l'antigene . Se l'antigene è presente nel campione , si lega a questo anticorpo enzimatico . Quando viene aggiunto un substrato incolore , se un colore sviluppa , indica la presenza di antigene . Nel test ELISA indiretto , antigene si svolge sulle pareti della micropiastra . Quando si aggiunge un campione sospettato di contenere anticorpi , la reazione antigene - anticorpo si verifica . Successivamente, viene aggiunto un anticorpo secondario enzimatico capace di reazione con la regione dell'anticorpo non legato . Quando si aggiunge il substrato incolore , che porta allo sviluppo di colore se il campione utilizzato contiene anticorpi .
Facilità di test

Una vasta gamma di anticorpi secondari marcati sono commercialmente disponibili . Inoltre , è possibile creare diversi anticorpi primari in una determinata specie e utilizzare lo stesso anticorpo secondario per il rilevamento. Questo rende il test ELISA indiretto facile da eseguire . Nel ELISA diretto , gli anticorpi primari devono essere specificamente preparati a reagire con l'antigene specifico che potrebbero essere presenti nel campione . Questo rende il test ELISA diretto svantaggioso rispetto alla prova indiretta .
Rapidità di test

Il test diretto ELISA è veloce in confronto alla prova indiretta perché utilizza solo un singolo anticorpo . Il test ELISA indiretto richiede un ulteriore passaggio di incubazione con un secondo anticorpo durante la procedura di test, che causa un ritardo nell'ottenimento dei risultati .
Sensibilità

Il test diretto ELISA è meno sensibile della forma indiretta della prova perché c'è molto meno amplificazione del segnale . Inoltre , l'etichettatura dell'anticorpo primario con un enzima può ridurre il suo profilo di immonoreactivity . In caso di ELISA indiretto , l'anticorpo primario non è etichettato e quindi , conserva la sua immunoreattività . Inoltre , ciascun anticorpo primario ha molti epitopi che possono legarsi con l'anticorpo secondario , ciò consente l'amplificazione del segnale , migliorando la sensibilità del metodo . Tuttavia, vi è una possibilità di reattività crociata tra l'antigene e l'anticorpo secondario , portando ad un errore nei risultati . Non c'è questa possibilità nel metodo diretto ELISA .