Protocollo per la trasfezione di GFP

L'uso della Green Fluorescent Protein rivoluzionato la biologia molecolare e cellulare , ha permesso ai ricercatori di visualizzare le cellule e le proteine ​​in modi mai prima possibile . Il suo impatto sulla ricerca scientifica era così profonda che nel 2008 Osamu Shimomura ha vinto il Premio Nobel per la Chimica per la scoperta e l'isolamento di GFP dalle meduse fluorescenti . Definizioni

Un gene è la sequenza di acido desossiribonucleico in cellule che è responsabile della produzione di una proteina specifica . Un plasmide è un pezzo di DNA separato che contiene un gene di interesse come GFP . Transfezione è il metodo per introdurre un plasmide nelle cellule .
Metodi

Transfezione genere comporta mescolando un plasmide DNA contenente un gene come GFP con i lipidi o sali . Cellule sono esposte a questa soluzione , che crea fori nella membrana cellulare , permettendo il plasmide nella cellula in cui il gene può essere espresso come proteina . Kit di transfezione commerciali sono disponibili , o i reagenti possono essere effettuate in un laboratorio. La scelta del metodo di trasfezione dipende dal tipo di cellule e plasmidi utilizzati. La GFP è visualizzato e monitorato con apparecchiature in grado di rilevare la fluorescenza .
Usi

GFP è di solito collegato a una proteina di interesse per la trasfezione . Il Comitato Nobel ha individuato il tracciamento di " danni ai nervi delle cellule durante la malattia di Alzheimer " e "come le cellule beta produttrici di insulina vengono creati nel pancreas di un embrione in crescita" come esempi .