Protocolli Retrovirus Infezione

contenenti un genoma RNA che viene incapsulato in un capside e involucro lipidico , i retrovirus contengono catene polipeptidiche che li aiutano collegano ai recettori nelle membrane delle cellule ospiti che infettano. Considerando che le informazioni ereditarie maggior parte delle cellule " è codificata nel DNA , quella dei retrovirus è contenuto in RNA ; retrovirus trasportano anche l'enzima trascrittasi inversa , permettendo loro di aderire al DNA ospite . Alcuni protocolli sono seguiti da laboratori l'infezione intenzionale della cella DNA con questi virus . Preparazione del Laboratorio

Alcune attrezzature di laboratorio e forniture necessari per aiutare nel processo di infezione retrovirale . L'equipaggiamento include 1 aiuto pipetta , 1 pipetta - man , cappa di coltura tissutale 1 , centigrado 37 gradi e incubatori Celsius a 32 gradi , e una centrifuga Eppendorf . Forniture comprendono piastre di coltura dei tessuti , una usa e getta pipetta Pasteur , qualificata surnatante retrovirale , polibrene filtro sterilizzato e sterilizzata per filtrazione, solfato di protamina .
Preparazione del Cell per infezione

Prior alle infezioni , cellule bersaglio devono essere divise in un piatto di tessuto - coltura e incubate in un incubatore Celsius 37 gradi con cinque per cento di CO2 . Lo scopo del periodo di incubazione è di creare cellule che sono il 50 % confluenti . Preparazione delle cellule è prima necessario garantire che le cellule sono ottimizzati per il processo di infezione . Il Nolan Lab della Stanford University suggerisce che l'infezione delle cellule iniziano sempre inizio infettando le cellule NIH 3T3 per ottimizzare i risultati del test .
Infettare Cellule

Dopo il periodo di incubazione è finita, i ricercatori dovrebbero garantire che le cellule sono sani e della confluenza di destra . Utilizzando la cappa tessuto - coltura , la materia cellulare viene aspirato e un surnatante virale viene applicata alle celle . Una volta applicato , la piastra deve essere delicatamente dondolava avanti e indietro per assicurarsi che sia distribuito uniformemente . Le cellule devono poi essere spin- inoculato inserendoli nella centrifuga Eppendorf e filatura a 2.500 rpm per novanta minuti ad una temperatura di 30 gradi Celsius . In seguito, le cellule devono essere incubate a 32 ° C per uno o due giorni . Il virus viene poi sostituito con le cellule estratte e messo in incubatrice da analizzare ovunque da tre a sette giorni dopo l'infezione iniziale .