Protocolli per la Hoechst colorazione

Le macchie Hoechst sono coloranti fluorescenti utilizzati per l'etichettatura di DNA e RNA attraverso la microscopia a fluorescenza e le tecniche di citometria a flusso. Hoechst 33258 e Hoechst 33342 è il più usato di queste macchie. Essi hanno la capacità di legarsi a molecole di DNA, causando i nuclei e mitocondri appaiano fluorescenti ai raggi ultravioletti. Protocolli per la Hoechst colorazione sono pratica comune in biotecnologica e laboratori di genetica, e comprendono tecniche di colorazione delle cellule utilizzando sia Hoechst 33258 e Hoechst 33342. Hoechst 33342 colorazione HSC e Stem Cell Purificazione protocollo

Questo protocollo viene utilizzato per colorare le cellule provenienti da topi midollo osseo. Tecnici preparano campione di midollo osseo con HBSS + soluzione di sale, tampone HEPES e siero fetale di vitello. Filano la soluzione e aggiungere ad un pre-riscaldato terreno DMEM. Hoechst macchia è poi aggiunto. La soluzione si trova in un 98,6 gradi Fahrenheit bagnomaria per esattamente 90 minuti, riporta il Dipartimento di Immunologia presso l'Università di Pittsburgh. Segmenti di DNA appaiono fluorescenti sotto un citometro.
Hoechst 33342 DNA colorazione

Durante questo protocollo, i tecnici sospesi Hoechst 33342 macchia in acqua distillata, aggiungere 2 per cento siero fetale di vitello al il campione cellulare, mantenendo il pH a 7,2 con l'aiuto di una soluzione tampone. Le cellule vengono poi incubate a 98,6 ° C per un'ora, e immediatamente analizzati con un pezzo di materiale chiamato citofluorimetro.

DNA colorato è quindi visibile e fluorescenti, secondo l'Università del Michigan Health System.


rilevazione del DNA usando il DNA-binding Fluorocromo Hoechst 33258

protocolli utilizzato un apparecchio chiamato spettrofotometro per analizzare segmenti di DNA e RNA. I tecnici usano Hoechst 33258 soluzione di lavoro e di timo di vitello campioni di DNA. Fanno anche una soluzione separata utilizzando il campione di DNA e di una sostanza chimica chiamata bromuro di etidio. Più tardi, si confrontano i risultati di colorazione delle cellule in entrambi i media, utilizzando uno spettrofotometro, secondo i protocolli attuali di Citometria.