Qual è elettroforesi su gel?

Gel elettroforesi è un metodo per separare, identificare e caratterizzare miscele di proteine ​​o acidi nucleici. Campioni denaturati migrano dopo l'applicazione di energia elettrica in un sottile, gel liquido in genere a base di poliacrilammide o agarosio. I campioni separati vengono colorate in modo che possano essere visti. Elettroforesi su gel è usato in proteine ​​e la ricerca di acidi nucleici e negli ospedali per identificare le proteine ​​anomale o modelli del DNA per diagnosticare le malattie, difetti genetici e le relazioni genetiche. Sample Preparation

Quando un detergente come dodecylsulfonate sodio (SDS) è aggiunto ad una proteina o acido nucleico, il detersivo associare e spiegare (denaturato) proteine ​​e acidi nucleici. Denaturazione delle proteine ​​rende più facile determinare il loro peso molecolare in elettroforesi. La quantità di campione richiesto è tipicamente da 100 a 500 nanogrammi per banda campione di proteine ​​e 5 a 100 ng per banda per gli acidi nucleici in un volume totale di circa 25 a 40 microlitri.
Gel

Un gel, in genere a base di poliacrilammide o agarosio, può essere preparato o acquistato per separare queste proteine. Il gel è molto simile a gelatina. Esso è principalmente acqua, ma è sufficientemente solida per la movimentazione. I gel contengono tampone per controllare il pH. Il gel è molto sottile (da 1 a 2 mm) e rettangolari. Un lato si presenta come un pettine con un sacco di denti mancanti. Le lacune sono chiamati pozzi.
Campione Caricamento

One posti il ​​gel in una camera con il tampone e proteine ​​denaturate sono aggiunti ai pozzetti. Campioni dei pesi molecolari noti sono aggiunti ai pozzetti esterni. I gel sono realizzati con diverse quantità di poliacrilammide. Una bassa resistenza gel (4 per cento) è migliore per separare molecole ad alto peso molecolare, mentre una forza gelificante superiore (12 percento) viene utilizzata per le molecole con peso molecolare maggiore. Un gel gradiente varia in forza di gel e può separare una vasta gamma di proteine ​​con la perdita di un po 'di risoluzione.
Elettromigrazione

Con l'applicazione di una tensione elettrica elevata, le proteine ​​denaturate muovono verso il fondo del pozzo. Maggiore è il peso delle proteine, più lentamente si muove. Quando l'elettricità è spento, le proteine ​​arrestano. Uno rimuove il gel dalla camera e rocce in un piatto con la tintura. Coloranti organici come Coomassie blu o coloranti metallici sono utilizzati per colorare le proteine ​​mentre coloranti fluorescenti quali bromuro di etidio sono utilizzati per gli acidi nucleici.
Analisi dei Risultati

Con l' rimozione di eccesso di macchia, si può vedere che le miscele separato in bande che sembrano scale. La posizione delle bande è confrontata con la distanza percorsa dalle norme per determinare il peso molecolare del campione in ciascuna banda. Il gel può essere disidratato ed essiccato con alcool in modo che possa essere salvato. L'intensità del colore della banda, allora può essere misurato per determinare la concentrazione della proteina in ciascuna banda.
Protocol Development
protocolli standard

sono disponibili per lavorare con ben proteine ​​note. Se un ricercatore sta lavorando con un campione sconosciuto, la forza del gel, tipo di buffer, pH, tensione, tempo di esecuzione, e la macchia potrebbe tutti bisogno di essere ottimizzato per ottenere la migliore separazione e di segnale.
Protocolli