TPA purificazione protocolli

tissutale del plasminogeno o TPA è un tipo di serina proteasi , che è una proteina in grado di distruggere i coaguli di sangue . TPA si trova nelle cellule che rivestono internamente i vasi sanguigni . Protocolli TPA sono parte della ricerca farmaceutica e medica a tratti , così come le malattie cardiache e polmonari , come l' embolia polmonare e infarto miocardico . TPA purificazione riguarda l'isolamento di questa proteina da altre molecole attraverso una serie di processi , compresi cromatografia ed elettroforesi . Purificazione di TPA da Hog Kidney

Questo protocollo è usato in studi di fibrinolisi , il processo di rottura del prodotto della coagulazione chiamata fibrina , legati alla formazione di tumori . Tecnici estrarre TPA da acetone - essiccato maiale rene con tampone acetato di potassio , a pH 4.2 . Poi , si aggiunge solfato di ammonio per indurre precipitazione cella . Essi aggiungono n - butil - sefarosio ai campioni, che vengono poi analizzate su un cromatografo . Concanavalina A è anche aggiunto e viene eseguita chromatograph.y per separare proteine ​​diverse .
Purificazione di TPA di ovaio di criceto cinese ed E. coli

Protein purezza è un fattore importante per il successo di esperimenti biologici . Purificata TPA è anche disponibile in commercio , risparmiando tempo ed evitando il rischio di compromettere l'esperimento a causa della soluzione purificata male . Questo protocollo coinvolge i processi di purificazione di TPA in mammifero e cellule batteriche . Tecnici precipitano campioni di cellule , li filtrare ed eseguire affinità e gel cromatografia . Più tardi , analizzano e confrontano i risultati , prima produzione commerciale .
Espressione Active TPA umana in E. coli

lisati cellulari purificati vengono aggiunti una lisina - Sepharose colonna , analizzato in un cromatografo e lavato con una soluzione di cloruro di sodio . Un altro campione viene caricato su una seconda colonna cromatografica contenente proteine ​​che si lega a TPA con un'affinità molto elevata . Un campione della seconda colonna è miscelata con una soluzione di zinco - sefarosio . La proteina risultante mostra più del 90 per cento di purezza , secondo la rivista " Applied and Environmental Microbiology . "