Il protocollo TMRE

tetrametilrodamina etile ( TMRE ) è un " lento , lipofila , cationico fluorescente reditribution dye" utilizzato nella MitoPT ™ TMRE /TMRM membrana mitocondriale Kit di valutazione potenziale , prodotto da dell'immunochimica Technologies , LLC . Il processo consente di visualizzare un gradiente di potenziale elettrico transmembrana nelle cellule. Preparazione del saggio

Il protocollo è semplice da seguire , e impiega circa 20 minuti per l'elaborazione a 37 gradi Celsius . Le cellule viventi usare nel saggio possono durare da diverse ore e diversi giorni per preparare uso . Le cellule di controllo può richiedere diverse ore per preparare , come hanno bisogno di essere indotto apoptosi .
Protocol Parte 1

cellule culturali con una densità ottimale per apoptosi o induzione di stress ossidativo , secondo il vostro specifico protocollo di induzione , ma non superiore a 10 ( 6 ) cellule /ml .
Protocol Parte 2

Allo stesso il tempo , la cultura di una popolazione non - indotta controllo negativo cellulare (alla stessa densità della popolazione indotta .
Protocol Parte 3

indurre apoptosi o volutamente depolarizzare mitocondri seguente il protocollo desiderato . parte
protocollo 4

Prepara 1X Assay /tampone di lavaggio .
protocollo Parts 5-8

preparare la di 1 mm o 0,2 mm MitoPT ™ TMRE /TMRM magazzino . Per Protocollo Parte 6 , preparare una diluizione 1:100 di 1 mm o una diluizione 1:20 di 0,2 mm MitoPT ™ TMRE /TMRM soluzione per chiodare in campioni di cellule in coltura.

per Protocollo Parte 7 , le cellule macchia con una concentrazione finale 20-200 nM di soluzione MitoPT ™ TMRE /TMRM .

per Protocollo Parte 8 , analizzare la dati.